總巰基測定試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

生物體內巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質，而且參與活性氧清除，后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和 GSH含量，能夠間接測定蛋白質巰基含量。

測定原理：

巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有大吸收峰。

自備實驗用品：

天平、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 1 mL×1 管，4℃避光保存。

樣品的制備：

1. 按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清，培養液：直接測定。

操作步驟：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 412nm，蒸餾水調零。

2、操作表