SDS-PAGE在蛋白質分子量測定中：應用和優(yōu)勢檢測技術服務詳情介紹

dànbáizhì分子量的測定是生命科學研究中的基本實驗步驟，對于dànbáizhì結構分析、表達水平評估和純度檢測具有重要意義。其中，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE） 是zuì常用的方法之一，以其高效、經濟和可重復性強的特點廣泛應用于dànbáizhì研究。本文將介紹 SDS-PAGE 的技術原理、實驗流程、應用場景、優(yōu)勢及局限性，并探討其在dànbáizhì分子量測定中的重要作用。

一、SDS-PAGE 的技術原理

SDS-PAGE 的核心原理是基于dànbáizhì在聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率來推測其分子量。該方法利用SDS（十二烷基硫酸鈉，Sodium Dodecyl Sulfate） 將dànbáizhì變性，使其僅根據(jù)分子量而非電荷進行分離。

1、 SDS 在dànbáizhì分離中的作用

（1）SDS 是一種強陰離子去污劑，能夠與dànbáizhì的疏水區(qū)結合，使dànbáizhìwánquán變性并形成線性多肽鏈。

（2）由于 SDS 賦予dànbáizhì均一的負電荷，因此在電場作用下，所有dànbáizhì僅根據(jù)其分子量大小進行遷移。

2、 聚丙烯酰胺凝膠的分離機制

（1）凝膠濃度調控分離范圍：聚丙烯酰胺凝膠的孔徑大小取決于單體（丙烯酰胺）和交聯(lián)劑（N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺）的比例。低濃度凝膠適用于大分子蛋白分離，而高濃度凝膠適用于小分子蛋白分離。

（2）dànbáizhì遷移與分子量關系：較小的dànbáizhì能更容易穿透凝膠孔隙，因此分子量小的蛋白遷移得更遠，而分子量大的蛋白移動較慢。

3、 遷移率與分子量的對數(shù)關系

dànbáizhì在 SDS-PAGE 中的遷移率（Rf 值）與其分子量的對數(shù)呈負相關，即：

log(MW)=a?b×Rf

其中 MW 為蛋白分子量，Rf 為遷移率。因此，通過測定標準蛋白的 Rf 值，可以繪制標準曲線，從而估算未知蛋白的分子量。

二、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的實驗流程

1、 凝膠制備

（1）分離凝膠（Resolving Gel）：主要用于分離dànbáizhì，濃度通常為 6%-15%，根據(jù)dànbáizhì分子量大小選擇適當?shù)臐舛取?/p>

（2）濃縮凝膠（Stacking Gel）：濃度較低（通常為 4%-5%），用于提高分辨率，使dànbáizhì在進入分離凝膠前聚集成窄條帶。

2、 樣品處理

dànbáizhì樣品需與SDS 變性緩沖液（含 β-巰基乙醇或 DTT）混合，在 95°C 加熱 5-10 分鐘，使dànbáizhìwánquán變性并形成均勻的負電荷。

3、 電泳

在緩沖液（Tris-Glycine-SDS）中，以恒壓或恒流進行電泳，一般 100-200V 運行 1-2 小時，直到指示染料（如溴酚藍）到達凝膠底部。

4、 dànbáizhì染色

（1）考馬斯亮藍染色（Coomassie Brilliant Blue Staining）：常用染色方法，靈敏度約為 50-100 ng。

（2）銀染（Silver Staining）：高靈敏度，可檢測到 1 ng 級別的dànbáizhì。

（3）熒光染料（如 SYPRO Ruby、CyDye）：適用于定量分析和高靈敏度檢測。

5、 分子量計算

通過與標準蛋白 Marker 進行對比，利用標準曲線估算未知蛋白的分子量。

三、SDS-PAGE 在dànbáizhì分子量測定中的應用

1、 確定dànbáizhì的分子量

（1）通過 SDS-PAGE 可估算未知蛋白的表觀分子量，用于初步鑒定。

（2）在dànbáizhì純化后，利用 SDS-PAGE 可確認目標蛋白是否為預期分子量。

2、 評估蛋白純度

用于檢測蛋白純化過程中的雜質蛋白條帶，以確保目標蛋白的純度符合實驗要求。

3、 監(jiān)測蛋白表達

在重組蛋白表達實驗中，SDS-PAGE 可用于比較不同誘導條件下蛋白的表達水平，評估表達系統(tǒng)的優(yōu)化情況。

4、 檢測蛋白翻譯后修飾

由于翻譯后修飾（如磷酸化、糖基化）會影響蛋白的分子量，SDS-PAGE 可用于觀察蛋白遷移率變化，提示可能的修飾發(fā)生。

四、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的優(yōu)勢及局限性

1、 SDS-PAGE 的優(yōu)勢

（1）操作簡單，實驗流程易于掌握，設備成本較低。

（2）適用范圍廣，可檢測大多數(shù)dànbáizhì，適用于生物醫(yī)藥、蛋白組學等領域。

（3）重復性好，電泳結果具有較高的穩(wěn)定性，適合日常實驗室檢測。

（4）分辨率較高，能夠清晰區(qū)分 5-250 kDa 范圍內的dànbáizhì。

2、 SDS-PAGE 的局限性

（1）分子量測定的精度有限：SDS-PAGE 只能提供dànbáizhì的“表觀分子量"，受翻譯后修飾和蛋白結構影響。

（2）無法識別蛋白序列：SDS-PAGE 只能分離蛋白，不能提供蛋白氨基酸序列信息，需要結合質譜（MS）或dànbáizhì印跡（Western Blot）進行鑒定。

（3）低豐度蛋白檢測靈敏度較低：考馬斯亮藍染色檢測下限較高，需要使用銀染或熒光染色提高靈敏度。

（4）難以分辨相似分子量蛋白：如果兩種dànbáizhì的分子量非常接近，可能無法實現(xiàn)清晰區(qū)分，需要更高分辨率的方法（如 2D-PAGE）。

SDS-PAGE 作為dànbáizhì分子量測定的經典方法，憑借其操作簡便、成本低、重復性好的優(yōu)勢，在生物研究和藥物開發(fā)中仍然占據(jù)重要地位。盡管其在高精度分子量測定和翻譯后修飾分析方面存在一定局限，但與Western Blot、LC-MS 等方法結合使用，可以更全面地解析dànbáizhì的分子特性。憑借zhuānyè的技術團隊和7大質量控制檢測平臺，百泰派克生物科技為從事dànbáizhì組學研究的科研人員提供高質量基于SDS-PAGE的dànbáizhì分子量測定服務，獲得廣泛認可。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數(shù)據(jù)轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術優(yōu)良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

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6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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