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細胞是生命活動的基本單元,而細胞表面則是其感知、識別和響應外界環境的前沿陣地。細胞表面蛋白廣泛參與信號轉導、物質轉運、細胞識別和黏附等過程,是連接細胞內外環境的關鍵橋梁。細胞表面dànbáizhì組學(surface proteomics)可以系統了解這些蛋白在不同生理和病理狀態下的變化。通過高通量手段對細胞表面蛋白進行全面鑒定和定量,研究人員能夠深入解析細胞狀態、識別功能亞群,并挖掘潛在的干預靶點。
一、細胞表面蛋白的研究價值
1、關鍵的細胞功能執行者
細胞表面蛋白不僅是細胞與外界環境的物理接觸點,更承擔著信息接收與傳遞、細胞間識別、組織構建與免疫調控等重要功能。在發育、生理穩態與疾病進展中,其表達譜和功能狀態常常呈現出高度動態變化。
2、多種研究場景的理想靶點
表面蛋白通常具有跨膜結構和胞外可識別區域,因此極易成為診斷標志物和干預靶點。無論是在基礎研究中識別細胞亞型,還是在應用研究中尋找藥物作用位點,表面蛋白都發揮著bùkětìdài的作用。
二、細胞表面蛋白組學的研究策略
1、富集技術
細胞表面蛋白在全細胞蛋白中比例極低,且多為疏水性強、跨膜結構復雜的膜蛋白,因此在進入質譜分析前,必須進行有效的選擇性富集。常用策略包括:
shēngwùsù化化學標記法:選擇性標記胞外區域賴氨酸殘基,通過親和捕獲將表面蛋白從總蛋白中分離。
代謝標記法:通過培養基中的特殊化合物引入可反應基團,間接標記并富集細胞膜表面糖蛋白或其他結構蛋白。
細胞表面剝離法:溫和釋放表面蛋白或片段,避免胞內蛋白污染,適用于對膜完整性要求較高的實驗體系。
這些方法可根據樣本類型、研究目標和質譜平臺特性靈活選擇與優化。
2、高分辨率質譜
富集后的表面蛋白經酶解生成肽段,隨后進入高分辨率質譜平臺進行分析。常用的數據采集模式包括DDA(Data Dependent Acquisition)和DIA(Data Independent Acquisition),DIA在數據完整性和重現性方面具有優勢。在質譜識別結果基礎上,結合跨膜結構預測工具(如TMHMM、Phobius)和亞細胞定位數據庫注釋,可以jīngzhǔn篩選真正定位于細胞膜表面的dànbáizhì,從而提升生物學解釋的可靠性。
3、數據分析策略
細胞表面蛋白組數據通常用于:
差異表達分析:識別不同條件下特異表達或上調的表面蛋白;
聚類與分群分析:結合多樣本或多時間點數據,劃分功能相近或狀態相似的細胞亞群;
通路富集與功能注釋:解析表面蛋白所涉及的通路與調控網絡,結合已有文獻支持構建調控模型。
三、細胞表面蛋白組學的主要應用方向
1、細胞狀態表征與亞群識別
不同類型或狀態的細胞往往具有差異化的表面蛋白表達譜,通過高通量分析可構建表面標志物圖譜,用于表征細胞功能狀態、識別稀有亞群或追蹤細胞命運演變。在干細胞研究、組織發育、生物過程動態監測等場景中,表面蛋白數據有助于建立更準確的細胞分類系統,尤其是在缺乏明確轉錄標志的體系中,其優勢尤為突出。
2、信號網絡解析與機制研究
細胞如何感知外界信號、如何整合多種刺激并作出反應,往往依賴表面蛋白與配體之間的相互作用。通過系統性表面蛋白組學分析,可以挖掘潛在的信號通路調控節點,并探索它們在細胞行為調節中的具體角色。這對構建動態信號傳導圖譜、理解應激響應機制、分析疾病驅動因子等具有重要意義。
3、生物標志物篩選與靶向干預探索
相較于胞內蛋白,細胞表面蛋白更適合作為臨床診斷和藥物作用靶點。表面蛋白的表達變化可直接反映細胞病理狀態,有助于發現疾病早期預警指標或療效預測因子。此外,在藥物開發中,系統性表面蛋白組數據可用于篩選特異性靶點,構建干預策略,特別適合應用于抗體類藥物、細胞治療或靶向遞送系統的設計。
細胞表面蛋白組學不僅是蛋白組學的一個分支,更是解讀細胞通信邏輯、狀態變遷和外界響應機制的核心窗口。它將基礎研究與轉化應用有效聯通,為組織構建、疾病理解和靶點發現提供了堅實的數據支撐。百泰派克生物科技將持續關注細胞表面蛋白組學領域的zuì新進展,助力生命科學研究邁向更高分辨率、更深層次的分子理解。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
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3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
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6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
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百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
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北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
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