蛋白質分子量測定：你應該遵循的10個步驟（二）檢測技術服務詳情介紹

dànbáizhì分子量（Molecular Weight, MW）是揭示其結構、功能和復合物組裝狀態的重要參數。無論是確認重組蛋白表達是否正確，還是驗證蛋白復合體的亞基組成，準確的分子量測定都是關鍵步驟。本文將系統梳理dànbáizhì分子量測定的10個核心步驟，幫助科研人員優化實驗設計，提高數據準確性。

dìyī步：明確測定目的與蛋白特性

不同實驗目的（如驗證表達、篩選修飾、研究相互作用）對應不同測定策略。建議提前了解蛋白的理論分子量、是否含有標簽、預期的聚集狀態，以及是否可能存在糖基化、磷酸化等修飾。

第二步：選擇合適的測定方法

常見dànbáizhì分子量測定方法包括：

• SDS-PAGE：基于電泳遷移率估算蛋白分子量，適合初篩和表達檢測，但對修飾蛋白或聚合體存在一定誤差。

• 凝膠過濾色譜（SEC）：適用于分析蛋白的聚集狀態或復合物組成，若結合多角度光散射（MALS）可提高分子量評估準確性。

• 質譜法（MS）：具備高靈敏度和高分辨率，適用于jīngquè測定蛋白分子量，尤其在分析修飾、異構體或復雜蛋白方面優勢顯著。

在百泰派克生物科技，我們提供從SDS-PAGE初篩到高分辨質譜jīngquè測定的一站式服務，滿足不同研究需求。

第三步：蛋白樣品的準備與純化

高純度的蛋白樣品是jīngzhǔn測定的前提。建議采用Ni-NTA親和純化、SEC等方式去除雜蛋白，避免影響測定結果。對于質譜分析，需進一步脫鹽、去除緩沖鹽或甘油等干擾成分。

第四步：估算理論分子量

使用ExPASy ProtParam等在線工具，根據dànbáizhì氨基酸序列快速計算理論分子量（考慮標簽與信號肽）。此值將作為實驗結果的參照。

第五步：驗證蛋白是否為單體

對于功能相關研究，判斷蛋白是否以單體或復合物存在至關重要。可通過原位質譜、SEC-MALS 或冷凍電鏡數據進行驗證。

第六步：選擇適配的質譜模式

• ESI-MS（電噴霧質譜）：適合大分子分析，靈敏度高。

• MALDI-TOF MS：適合高通量篩查，特別是在蛋白修飾篩查中應用廣泛。

不同模式對樣品濃度、緩沖體系、帶電狀態有不同要求，建議根據蛋白特性調整上機參數。

第七步：優化儀器參數與上樣策略

控制進樣流速與濃度，避免多聚體干擾

• 對于LC-MS，使用低鹽緩沖體系，適配LC柱類型

• 對于MALDI，選用合適的基質（如sinapinic acid）增強信號

第八步：數據解析與分子量計算

使用zhuānyè軟件（如BioPharma Finder、MaxQuant、FlexAnalysis）進行譜圖分析。對照理論分子量，判斷是否存在修飾、降解、剪切等現象。

第九步：結果驗證與交叉驗證

建議使用兩種以上方法進行交叉驗證（如SDS-PAGE結合質譜），提高dànbáizhì分子量測定數據可靠性。特別是在新蛋白表達、結構生物學研究中尤為重要。

第十步：歸檔與數據標準化

將實驗流程、參數設定、質譜原始數據和分析結果標準化歸檔，不僅便于后期重復實驗，也有利于成果發表與zhuānlì申請。

科學、jīngzhǔn、可復現是關鍵，dànbáizhì分子量測定不僅是一個技術過程，更關乎研究的可靠性和可重復性。從實驗設計到數據解讀，每一步都值得嚴謹對待。在百泰派克生物科技，我們融合高分辨質譜平臺（如Orbitrap、Q-TOF）與zhuānyè數據分析團隊，為您提供高準確度的dànbáizhì分子量測定服務，支持從基礎研究到新藥開發的多維應用。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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