基于標簽的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT，SILAC檢測技術服務詳情介紹

細胞中dànbáizhì組豐度的動態變化對各種生命過程都有重要影響。例如，許多疾病的發生和發展通常伴隨著某些dànbáizhì的異常表達。定量dànbáizhì組學是對一個基因組中表達的所有dànbáizhì或一個復雜混合系統中的所有dànbáizhì進行準確的定量和鑒定。目前，定量dànbáizhì組學技術主要分為標記策略和非標記策略，其中標記策略分為體內標記（如SILAC）和體外標記（如iTRAQ，TMT）。

iTRAQ是AB SCIEX公司于2004年開發的一種定量dànbáizhì組學研究技術。該技術可以比較許多不同樣品中的dànbáizhì。例如，它可以研究不同病理條件或不同發育階段的組織樣品中dànbáizhì表達水平的差異。同時，iTRAQ可以準確地定量和鑒定一個基因組中表達的所有dànbáizhì或一個復雜混合系統中的所有dànbáizhì。iTRAQ可以使用8種不同的同位素試劑同時標記和比較8種不同的dànbáizhì樣品。標記試劑由報告基團，平衡基團和胺特異性反應基團組成。

iTRAQ的工作流程

iTRAQ技術的一般過程如下圖所示。簡要地說，樣品被yídànbáiméi裂解后，被烷基化并酶消化成肽段。用iTRAQ試劑的標記標簽對產生的肽段進行差異標記，然后將標記的樣品混合在一起進行LC-MS/MS分析。

iTRAQ的優勢 1. 在一次實驗中，iTRAQ可以同時標記4至8個樣品。操作簡單快捷。適用于多個樣品的高通量檢測，并且實驗設計更加靈活； 2. iTRAQ是在肽段水平上進行的體外標記，適用于許多類型的生物樣品； 3. iTRAQ具有重復性好、靈敏度高的特點，可以同時進行定性和定量。

TMT是美國Thermo Fisher Scientific開發的一種肽體外標記技術。該技術zuì多可以使用10個同位素標簽來標記多肽的氨基。經過LC-MS/MS分析后，可以同時比較10個不同樣品中dànbáizhì的相對含量。TMT廣泛用于疾病標志物篩選、藥物作用靶標、動植物抗病或抗逆機制、動植物發育和分化機制等領域。

TMT的工作流程

TMT的一般過程如下圖所示。將不同的dànbáizhì樣品變性、還原、烷基化并消化成肽段樣品。然后將這些肽段樣品用TMT試劑盒標記后合并為一個樣品。使用HPRP液相色譜分離合并的樣品，并將餾分串聯為12個樣品。純化后，通過HPLC-MS分析每個樣品。分析數據以獲得dànbáizhì的定性和相對定量信息。

TMT的優勢 1. 高靈敏度：可以檢測低豐度的dànbáizhì； 2. 分離能力強：可以分離酸/堿蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白、不溶性蛋白等； 3. 應用范圍廣：可以鑒定任何類型的dànbáizhì，包括膜dànbáizhì、核dànbáizhì和胞外dànbáizhì； 4. 高通量：可以同時分析10個樣品，特別適合對采用多種處理方法或多種處理時間的樣品進行差異dànbáizhì分析。

SILAC是用于高通量定量dànbáizhì組學的有效方案，它是根據依賴于必需氨基酸的哺乳動物細胞增殖的原理設計的。SILAC用于定量dànbáizhì組學研究，可以分析細胞中的dànbáizhì相互作用和dànbáizhì表達差異，為復雜的哺乳動物細胞dànbáizhì組學的全面系統的定性和定量分析提供有效的解決方案。

SILAC的工作流程

SILAC的一般過程如下圖所示。向細胞培養基中添加輕、中或重穩定同位素標記的必需氨基酸（主要是賴氨酸和jīngānsuān），通過細胞的正常代謝，所有新合成的dànbáizhì都被標有穩定同位素。等量混合所有類型的dànbáizhì，通過SDS-PAGE分離、切膠和酶消化后，用LC-MS/MS分析可以獲得相關dànbáizhì的定量和定性結果。

SILAC的優勢 1. SILAC是一種活細胞水平的標記技術。標記效果穩定有效，標記效率不受裂解液的影響。 2. SILAC需要的樣品更少，通常每個樣品僅幾十微克的dànbáizhì就足夠了。 3. SILAC使用質譜法同時鑒定和定量多種dànbáizhì。 4. SILAC使用體內標記技術，接近樣品的真實狀態。

參考文獻 1. Zieske Lynn R. A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies. Journal of Experimental Botany, 2006, 57(7):1501-1508. 2. Lichao Zhang, Joshua E. Elias. Relative Protein Quantification Using Tandem Mass Tag Mass Spectrometry. Methods in Molecular Biology, 2017, 1550:185. 3. Esthelle Hoedt, Guoan Zhang, Thomas A. Neubert. Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture (SILAC) for Quantitative Proteomics. Adv Exp Med Biol. 2014, 806:93-106.

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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