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APEX 蛋白標記(ascorbate peroxidase-based proximity labeling)是一種基于抗壞血酸過氧化物酶的鄰近標記技術。APEX 是一種來源于植物的過氧化物酶,能夠催化shēngwùsù酰胺-酚(biotin-phenol, BP)或其他酚類底物在過氧化氫(H?O?)存在下形成活性自由基。這些自由基的半衰期極短,僅能擴散約 20 nm,從而能夠在短時間(秒級)內選擇性地標記 APEX 附近的蛋白質,而不會影響遠離 APEX 的蛋白。隨后,通過鏈霉親和素親和純化和質譜分析可以高效鑒定鄰近的蛋白質組。APEX 蛋白標記的主要作用在于揭示細胞內蛋白的空間分布及動態相互作用。該方法能夠在活細胞內實現快速標記,不受細胞固定、通透性等限制,特別適用于研究特定亞細胞結構或短時相互作用的蛋白質網絡。例如,在神經生物學研究中,APEX 蛋白標記被用于解析突觸相關蛋白的組成,以研究神經遞質傳遞過程中的關鍵調控蛋白。此外,在線粒體、內質網、高爾基體等亞細胞器蛋白組學研究中,APEX 也展現出dútè的優勢,能夠在細胞生理環境下jīngquè標記并富集特定細胞器的蛋白組。近年來,該技術在病毒學、癌癥生物學以及免疫信號通路研究中也得到了廣泛應用,為解析復雜的蛋白相互作用網絡提供了強有力的工具。
APEX 蛋白標記的優勢之一在于其標記速度快、空間分辨率高,可在 1 分鐘內完成鄰近蛋白的shēngwùsù化,極大地降低了細胞狀態變化對實驗結果的干擾。同時,由于shēngwùsù-鏈霉親和素系統的高親和力,APEX 標記的蛋白可以高效富集,提高質譜鑒定的靈敏度。此外,APEX 可基因編碼并融合到靶蛋白上,使其能夠靶向特定細胞器或蛋白復合物,為解析動態蛋白質網絡提供工具。
與其他鄰近標記技術(如 BioID)相比,APEX 蛋白標記的時間分辨率更高,適用于快速發生的蛋白相互作用事件,而 BioID 需要較長的孵育時間(通常為 18–24 小時)。此外,APEX 可在無氧環境下發揮作用,使其成為研究線粒體、核孔復合物等缺氧環境中的蛋白互作網絡的理想選擇。然而,APEX 也存在一定局限性,例如可能引入非特異性背景噪音,且 H?O? 處理可能對細胞產生氧化損傷,因此實驗設計時需優化 H?O? 濃度和處理時間,以確保實驗的特異性和可靠性。
近年來,APEX 蛋白標記技術的改進不斷推進其應用邊界。例如,APEX2 作為 APEX 的改良版本,具有更高的催化活性和穩定性,可在更低濃度的 H?O? 下實現高效標記,減少細胞毒性。此外,結合 CRISPR-Cas9 介導的基因編輯技術,APEX 使得細胞器蛋白組學研究更加jīngzhǔn,可在內源水平上實現靶蛋白的特異性標記,提高數據的生理相關性。
百泰派克生物科技依托優良的蛋白質組學平臺,為客戶提供高質量的蛋白分析服務。我們具備豐富的實驗優化經驗,能夠根據不同研究需求優化標記條件,提高實驗的靈敏度和特異性。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對蛋白質的氨基酸組成分析,N端測序,C端測序和全序列分析,以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質,提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種蛋白質標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!
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