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如何通過細節挑選血清？2021/9/22
體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質無任何抵抗力，挑選血清是一個很艱難的決定，有些血清可能前期養細胞沒有看到多大的問題，但是養著養著細胞突然暴斃，之前我們一直以為是細胞或者培養基的問題，后來給血清...
分享哺乳動物細胞培養的9個基本技巧！2021/9/22
一、凈化空氣在開始任何組織培養工作之前，打開新風系統至少15分鐘，確保有清潔的空氣流入。要始終確保沒有任何東西覆蓋它。每周打開紫外線燈3-4次，最多半個小時，可以幫助保持你的實驗室無污染，但你應該記住...
怎么培養好的你細胞？2021/9/22
細胞培養是細胞和分子生物學的主要工具之一，提供研究細胞正常生理學和生物化學的優秀模型系統（例如，代謝研究、衰老）、藥物和有毒化合物對細胞的影響，突變和致癌。它還用于藥物篩選和開發，以及大規模生產生物化...
消除細胞聚團就是這么簡單！2021/9/22
當在生長培養基中進行單懸浮細胞培養時，樣本中出現細胞丟失的情況并不少見。當細胞破裂時，它們會釋放DNA和碎片，導致細胞聚集成大團塊，使其難以擴張。細胞聚團既可導致細胞凋亡，也可引起細胞死亡。隨著更多的...
清晰的條帶是這樣跑出來的——western blot八大秘訣！2021/9/17
1.制膠：先制分離膠，再制濃縮膠，嚴格按照制膠說明書來就可以了。需要注意的一點是制膠一定要混勻！混勻！混勻！個人經驗是每加一種試劑，就混勻一下，直到最后一種試劑加完。對于初學者，還要區分制膠的玻璃板是...
如何在WB中順利獲取大分子蛋白？2021/9/17
分子量大于150Ka的蛋白，經常折磨我們實驗人。想當初，辛辛苦苦忙到深夜，結果發現顯影空空如也。連續幾個月如此，內心是何等抓狂。當大分子條帶第一次出來的時候，心里特別開心，就像見到了初戀情人一樣。看到...
如何優雅地獲得漂亮小分子蛋白條帶2021/9/17
做過Western-Blot的童鞋知道，分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做。小分子蛋白虐我千百遍，我待小分子蛋白如初戀。抱怨是沒用的，想方設法解決問題才是正道。一次又一次的調整方案，一次又一次的徒...
分享總結Western跑磷酸化蛋白的要點2021/9/17
抗體工欲善其事必先利其器，抗體很關鍵。這里我們要說的并不是最貴的就是好的，如果條件允許，建議同時購買不同廠家的抗體，一起來試一試，因為有時候即使是好的品牌，不同批次穩定性也不一樣。抗體從訂購到到貨有一...
盤點RACE技術的幾種類型及特點2021/9/16
在分子生物學中，未知基因全長序列的獲取是研究新基因的重要步驟。當我們不清楚目的基因的完整序列時，獲得未知序列的方法有反向PCR、mRNA差異顯示技術、基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等等.......
搞定內參，駕馭 Western blot 已成功一半2021/9/15
westernblot對絕大多數實驗新人而言，絕對是心中痛，一碰就要抓狂。沒辦法,誰讓導師發話了，WB做不好，延畢就是分分鐘的事兒。這還真是讓小伙伴們感嘆道，WB想說愛你不容易。那么為了*馴服WB，獲...
用磷酸化抗體做Western Blot時，要注意哪些？2021/9/15
今天給大家分享一下在用磷酸化抗體做WesternBlot時，應該注意些什么。1.警惕內部敵人一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑，因為組織或細胞裂解時會釋放出...
Western blot實驗結果分析2021/9/15
Westernblot實驗結果分析①微笑條帶解析：由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠處理辦法：配膠時一定要充分混勻，待其充分凝固后再做后續試驗②帶出現紋理現象解析：樣品不溶性顆粒處理...
WB的免疫印跡操作分享2021/9/14
①膜處理（甲醇1min，風干（放濾紙上），甲醇1min，水1min）②封閉（用TBST配5%牛奶）1h配搖床③加一抗，牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書，看膜的大小配多少一抗，4°過夜。④室溫孵育20m...
WB過程中最重要的環節——轉膜2021/9/14
①跑到溴酚藍距離最下緣25px時配電轉液（tris3.03g，甘氨酸14.4g，甲醇100ml，定容至1L）②在電轉液中剝膠，裁膠，剪膜，膜活化（甲醇1min，去離子水1min，電解液15min）③“...
WB電泳技巧分享2021/9/14
①清洗玻璃板，去離子水沖，風干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈，相當重要）②按說明書配膠。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配10ml的10%的膠（20~80kDa通用）膠的濃度根據...
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