實驗方法原理 血糖中β-D葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下,氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶催化下,氧化氧的受體——鄰聯甲苯胺產生有色化合物。在有足夠的葡萄糖氧化酶和過氧化物酶存在下,形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比,并在625 nm處有zui大吸收。
實驗材料 葡萄糖
試劑、試劑盒 鄰聯甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根過氧化酶
儀器、耗材 試管 試管架 吸量管 722S分光光度計
實驗步驟
溶液配制:
1. 1%鄰聯甲苯胺溶液:1 g鄰聯甲苯胺溶于100 ml無水乙醇,于棕色瓶保存。
2.醋酸緩沖液(pH 5):300 ml 0.15 mol/L醋酸(8.7 ml冰乙酸定容至1 L),700 ml 0.15 mol/L醋酸鈉混合后調pH 至5(用氫氧化鈉或鹽酸)。
3.葡萄糖氧化酶,辣根過氧化酶:10 mg溶于10 ml水中,放于4 ℃保存。
4.含鄰聯甲苯胺試劑:150 mlpH5醋酸鹽緩沖液,1 ml葡萄糖氧化酶溶液,1 ml過氧化物酶,1 ml 1%鄰聯甲苯胺溶液,混合后保存在4 ℃下,可存放7周。
5.標準葡萄糖溶液:100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液(安息香酸0.3 g溶于100 ml水),成1 mg/ml。
實驗操作:
取三支試管,按如下順序操作:
空白管蒸餾水 1 ml
標準管標準葡萄糖溶液 1 ml
測定管待測樣品(無蛋白血濾液) 1 ml
待測樣品含糖控制在400~600 μg/ml。每隔半分鐘依次向各管加入含鄰聯甲苯胺試劑5 ml,立即混合并準確反應10 min(夏季反應時間可縮短),在波長625 nm處,每隔半分鐘分別讀取光密度值,以空白作為比色時的對照。
按下列公式計算:
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