肉桂酸-4-羥化酶（C4H）測試盒

分光光度法 50管/48樣

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

C4H 又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶，多存在于高等植物、酵母、菌類中，該酶催化肉桂酸羥化作用產生 4-香豆酸鹽，是苯丙烷途徑中繼 L-苯丙氨-酸解氨酶之后的第二個關鍵酶。

測定原理：

C4H 催化肉桂酸和 NADP 生成 4-香豆酸鹽和NADPH，在 340nm 下測定 NADPH 生成速率， 即可反映 C4H 活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 60 mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；

粗酶液提取：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

肉桂酸-4-羥化酶（C4H）測試盒