我司供應的生化檢測試劑盒，僅供科研使用。

商品介紹：

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外，NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

通用規則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

實驗通用規則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

CNE1, 人鼻咽癌細胞系     Human

HT-29, 人結腸癌細胞     Human

T24, 人膀胱癌細胞     Human

5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系     Human

HCT116, 人結直腸癌細胞     Human

LncaP, 人前列腺癌細胞     Human

6-10B, 人鼻咽癌細胞系     Human

lovo, 人結腸癌細胞     Human

DU 145, 人前列腺癌細胞     Human

Hep-2, 人喉癌細胞系     Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌細胞     Human

HL-60, 人早幼粒白血病細胞     Human

CaEs-17, 人食管癌細胞株     Human

MG-63, 人骨肉瘤細胞     Human

kasumi-1, 人白血病細胞株     Human

RBE, 人肝膽管癌細胞     Human

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞     Human

KM3, 人多發性骨髓瘤細胞     Human

QGY-7701, 人肝癌細胞     Human

PANC-1, 人胰腺癌細胞     Human

Girdin    肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體     根霉屬的菌

AKAP2    蛋白激酶A2抗體     戴爾根霉

AT2R2    血管緊張素Ⅱ受體2抗體     科恩根霉

ASH1L    ASH1蛋白抗體     華根霉

AADACL2    芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白2抗體     白腐菌

AAMP    血管內皮細胞遷移蛋白抗體     蕁麻青霉

AKR1B10    醛糖還原酶相關蛋白質抗體     小刺青霉

AKR1C2    膽汁酸結合蛋白DDH2抗體     婁地青霉

ANGPTL3    血管生成素樣蛋白3抗體     產紫青霉

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶線粒體抗體     特異青霉

phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化內收蛋白a1抗體     淡紫青霉

ATG16L2    自噬體ATG16L2蛋白抗體     島青霉

ACPT    睪丸酸性磷酸酶抗體     灰黃青霉

Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗體     園弧青霉=桔灰青霉

AKIP    極光激酶A相互作用蛋白1抗體     頂青霉

APOL6    載脂蛋白樣蛋白6抗體     黃綠青霉

ARTS    凋亡相關蛋白TGFb信號抗體     產黃青霉

A2LD1    A2LD1蛋白抗體     阿達青霉

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺轉移酶α4Gn-T抗體     擬青霉

AADAC    芳香乙酰胺脫乙酰基酶抗體     棉鈴蟲擬青霉

AADACL4    芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白4抗體     玫煙色擬青霉

AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉移酶抗體     露濕漆斑菌

測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產生氣泡

2.溫浴

1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。