測(cè)定原理：

TPX 催化H₂O₂氧化二硫蘇糖醇（DTT），H₂O₂的吸收波長(zhǎng)為240nm，通過(guò)測(cè)定240nm吸光度的下降速率，通過(guò)對(duì)照減去過(guò)氧化氫酶（CAT）催化分解的H₂O₂，即可計(jì)算出TPX活性。因此，本試劑盒可以同時(shí)測(cè)定樣品TPX和CAT活性。

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一：液體×1 瓶，室溫保存。

試劑二：液體×1 瓶，-20℃保存。

試劑三：液體×1 支，4℃。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，

加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）； 然后 8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

TPX 測(cè)定操作：

1. 分光光度/酶標(biāo)儀計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到240nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴預(yù)熱30min。

3. CAT活性測(cè)定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入4μL上清液，180μL試劑一，16μL試劑三，迅速混勻后于240nm 測(cè)定10s和130s吸光度，記為A1和A2。

4. 總活性測(cè)定管：取取微量石英比色皿或96孔板，加入4μL上清液，180μL試劑二，16μ試劑三，迅速混勻后于240nm 測(cè)定10s和130s吸光度，記為A3和A4。

注意：每個(gè)樣品都需要做對(duì)照管，以減去過(guò)氧化氫酶（CAT ）催化降解的H₂O₂。