大鼠脫氧吡啶酚elisa試劑盒使用說明書

上海微蒙生命科技有限公司是中國大、品種zui齊全的食品安全檢測試劑盒和動物疫病診斷試劑盒的生產廠家，產品技術水平達到國內*、世界水平，并在世界上開發出呋喃西林代謝物檢測試劑盒、呋喃妥因代謝物快速檢測試劑盒等35種食品安全檢測試劑盒，20種動物疫病診斷試劑盒以及8種膠體金快速檢測卡，公司為了適應市場發展的需要，正在進行上百種試劑盒的研發，不久即將上市銷售。
使用目的：
　　本試劑盒用于測定大鼠血清、尿液及相關液體樣本中脫氧吡啶啉（DPD）含量。
實驗原理
　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠脫氧吡啶啉（DPD）水平。用純化的大鼠脫氧吡啶啉（DPD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脫氧吡啶啉（DPD），再與HRP標記的脫氧吡啶啉（DPD）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脫氧吡啶啉（DPD）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠脫氧吡啶啉（DPD）濃度。 
大鼠elisa試劑盒組成 
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（160ng/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
大鼠elisa試劑盒標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80 ng/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40 ng/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20ng/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10 ng/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
　5 ng/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。