為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法?本章由上海勁馬生物為您正確回答關于試劑盒為什么要采用競爭Elisa法的問題?
根據我司資深技術分析:小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗體上的結合位點,標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的生物素化抗體愈少,zui后的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);
(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結合物"(conjugate);
(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:競爭法測抗體當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質,然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合ELISA一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌后再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般采用此法。
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