等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Isothermal Amplification）是一種在恒定溫度下高效擴(kuò)增特定核酸序列的分子生物學(xué)技術(shù)。與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，該技術(shù)無需熱循環(huán)儀，僅需簡單的恒溫設(shè)備即可完成擴(kuò)增反應(yīng)，具有操作簡便、反應(yīng)快速、靈敏度高等顯著優(yōu)勢，這些特性使其在即時診斷領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。在眾多等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中，LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）技術(shù)因其高靈敏度和強(qiáng)特異性而成為主流選擇。然而，該技術(shù)也存在明顯局限：其依賴4-6條特異性引物和Bst DNA聚合酶的復(fù)雜反應(yīng)體系，在實(shí)際應(yīng)用中容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增，導(dǎo)致假陽性結(jié)果，嚴(yán)重制約了其在臨床診斷中的應(yīng)用可靠性。

最新研究表明，引入Tte UvrD Helicase可有效突破這一技術(shù)瓶頸。Tte UvrD Helicase源自嗜熱菌Thermus thermophilus，熱穩(wěn)定性強(qiáng)，具有的DNA解旋能力，可高效解開雙鏈DNA，適用于高復(fù)雜度模板的處理，顯著降低LAMP實(shí)驗(yàn)中的非特異性擴(kuò)增[1]。

圖1. Tte UvrD解旋酶在HDA擴(kuò)增技術(shù)中的原理圖示意[2]

在LAMP反應(yīng)中，高濃度引物（如FIP/BIP）容易形成引物二聚體或與非目標(biāo)序列結(jié)合，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。Tte UvrD Helicase能夠主動解旋雙鏈DNA，包括由引物二聚體或非特異性退火形成的非目標(biāo)結(jié)構(gòu)，從而顯著減少因引物錯誤配對或模板二級結(jié)構(gòu)引起的假陽性擴(kuò)增，提高LAMP反應(yīng)的特異性。

在此，我們向您推介翌圣生物全新研發(fā)的Tte UvrD Helicase（Cat#14572），該產(chǎn)品能在60–75℃高溫下保持高效活性，顯著提升等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的特異性和速度，避免非特異性擴(kuò)增。該酶尤其適用于各種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，如解旋酶依賴擴(kuò)增（HDA）、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）、重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）、滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）和鏈置換擴(kuò)增（SDA）等。

翌圣Tte UvrD Helicase（Cat#14572）

分別使用兩組LAMP引物配制LAMP反應(yīng)體系，分別在每組體系中設(shè)置添加10 ng Tte UvrD Helicase實(shí)驗(yàn)組和未添加Tte UvrD Helicase對照組，結(jié)果顯示翌圣Tte UvrD Helicase的引入能有效消除LAMP體系的非特異性擴(kuò)增，且不影響陽性樣本的檢測。

將20 ng Tte UvrD Helicase分別與核酸底物孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣的3個批次Tte UvrD Helicase均未檢測出核酸外切酶、切口酶或RNase 殘留，為您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性保駕護(hù)航。

圖3. Tte UvrD Helicase核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結(jié)果