MB10067.4 v.A

  細(xì)胞培養(yǎng)液氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

（中文版）

主要用途

  細(xì)胞培養(yǎng)液氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)硝基藍(lán)四氮唑染料，受到超氧陰離子O₂^-的還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑*素沉淀，由分光光度儀比色分析，定量檢測(cè)細(xì)胞外超氧陰離子活性氧族的生成和增加的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O^2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H₂O₂）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O₂^-的直接還原，便產(chǎn)生不溶性藍(lán)黑色甲暨色素，在分光光度儀下（650nm波長(zhǎng)），呈現(xiàn)吸光峰值的變化。據(jù)此定量檢測(cè)細(xì)胞外超氧陰離子活性氧族的濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容

  染色液（Reagent A）      2毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書  1份

保存方式

保存  染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免光照；有效保證6月

用戶自備

*細(xì)胞培養(yǎng)液（GMS12052）：用于細(xì)胞操作所需的培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞染色孵育

分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于染色定量

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)細(xì)胞
• 分別小心按下表移取多孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液上清到相應(yīng)的另一多孔細(xì)胞培養(yǎng)板（注意：避免觸及細(xì)胞）

• 加入適量的  染色液（Reagent A）到上述培養(yǎng)板里的每個(gè)培養(yǎng)孔里（見(jiàn)下表）

• 輕輕搖動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)板，混勻
• 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育60分鐘
• （選擇步驟）肉眼觀察：溶液呈現(xiàn)藍(lán)黑色，顯示超氧陰離子濃度增強(qiáng)

7． 即刻放進(jìn)分光光度儀測(cè)讀，波長(zhǎng)為650 nm

8． 構(gòu)建細(xì)胞外超氧陰離子活性氧生成曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)、時(shí)間點(diǎn)或藥物處理濃度等

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為100次（96孔板）操作
• 細(xì)胞培養(yǎng)操作，須無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行
• 操作時(shí)，須戴手套
• 孵育時(shí)，避免光照
• 如果超氧陰離子活性氧濃度過(guò)低，可以延長(zhǎng)孵育時(shí)間至4小時(shí)
• 建議96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔細(xì)胞密度為10⁴細(xì)胞
• 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰