特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑盒產品說明書

（中文版）

主要用途

 特殊石蠟切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和非離子化還原性染料靛酚溶解氧化技術，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中（zui大程度保留的）脂褐素沉積現象，從而在光學顯微鏡下觀察到紅色表達的細胞作為細胞復制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的脂褐素檢測，但不適用于人體心肌組織和小鼠腦組織的脂褐素檢測，與紅細胞產生不同染色。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。  

技術背景

細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細胞內與年齡相關的熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里，例如心臟、肝臟和神經等，尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質，成為細胞衰老中后期的獨立指征。染料二氯酚靛酚（2,6-Dichlorobenzenone-indophenol或2,6-Dichlorophenolindophenol）經過酸化處理還原且非離子化，具有脂溶性，特異性染色組織細胞中的脂褐素，除人體心肌組織和小鼠腦組織外。同時使紅細胞呈現藍色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以zui大程度保護組織中的脂質成分是二氯酚靛酚染色的關鍵。

產品內容

 脫蠟液（Reagent A）          50毫升

 凈化液（Reagent B）   10毫升

 清理液（Reagent C）  150毫升

 染色液（Reagent D）    5毫升

產品說明書           1份

保存方式

保存 染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；  染色液（Reagent D）避免光照；有效保證6月

用戶自備

烘箱：用于石蠟切片處理

小型染色缸：用于樣品操作的容器

光學顯微鏡：用于觀察染色后的組織細胞

實驗步驟

實驗開始前，從－20℃冰箱里取出 染色液（Reagent D），在室溫下融化，避免光照。然后進行下列操作。

• 脫蠟處理

• 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升 脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 脫蠟液（Reagent A）
• 重復實驗步驟4至6一次
• 小心加上200微升 凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent D），鋪滿整個切片樣品表面（注意：加入前混勻 染色液（Reagent D）；參見注意事項7）
• 室溫下孵育5分鐘，或直至可見紅色，避免光照
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent D） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent C）中5次（2秒/次）（注意：參見注意事項8）
• 輕輕移去切片上的 清理液（Reagent C） 
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）（注意：參見注意事項9）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：脂褐素陽性細胞呈現紅色，非脂褐素細胞呈現無色、藍色或淡粉紅色，紅細胞呈現藍色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 本產品不適合人體心肌組織和小鼠腦組織染色
• 本產品適合于含有紅細胞的樣本
• 建議用戶避免使用常規石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 使用時，避免污染母液
•  染色液（Reagent D）避免光照；由于溶液較酸，操作時注意安全
• 染色后清洗不宜過久，否則容易褪色
• 封片處理忌用極性脂類溶劑，例如乙醇等，否則會去除色素
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察，放置過久，染色會出現褪色
• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定著色清晰