石蠟切片組織馮庫薩染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

 石蠟切片組織馮庫薩（VON KOSSA）染色試劑是一種旨在使用標準化的化學分離石蠟方法和銀還原技術，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中鈣沉積現象的而經典的技術方法。該技術經過精心改良VON KOSSA方法、成功實驗證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

鈣鹽變化是骨細胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標志之一。通過嗜銀染色，鈣離子受到強光還原，由金屬銀沉積取代，呈現黑色。

產品內容

 去石蠟液（Reagent A）       自備

 補水液A（Reagent B）  100毫升

 補水液B（Reagent C）  100毫升

 補水液C（Reagent D）  100毫升

 補水液D（Reagent E）  100毫升

 清理液（Reagent F）  120毫升

 染色液（Reagent G）   5毫升

 平衡液（Reagent H）   5毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent G），避免光照；有效保證6月

用戶自備

核固紅復染試劑盒（GMS40011）：用于常規染色后復染

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

60瓦燈：用于還原鈣離子

光學顯微鏡：用于組織細胞染色后觀察分析

實驗步驟

• 去石蠟處理

• 取出10片待測的石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，此步很重要）
• （選擇步驟）放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的 補水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升 清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F） 

二、 樣本染色處理

• 小心加上100微升 染色液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下置于太陽光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
• 小心移去切片上的 染色液（Reagent G） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 輕輕移去切片上的 清理液（Reagent F） 

三、 樣本復染處理

• 小心加上100微升 平衡液（Reagent H）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意： 平衡液（Reagent H）具有褪色調節作用）
• 小心移去切片上的 平衡液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的 清理液（Reagent F） 
• （選擇步驟）樣本復染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：鈣沉積陽性細胞呈現黑色（如果復染：細胞質呈現粉紅色，細胞核呈現紅色）

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時，否則造成樣品支離破碎
• 用戶可以使用二甲苯代替脫蠟液（ReagentA)
• 所有操作在室溫下進行
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干。空氣中晾干狀態為沒有水滴，呈濕潤狀態，可見反光
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見黑色即可終止染色
• 建議使用 核固紅復染試劑盒（GMS40011）
• 組織細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
• 本公司提供系列組織細胞金屬元素染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰