豬腸三葉因子(ITF)ELISA檢測試劑盒操作方法 

產品簡介：

ELISA試劑盒現貨  *，免費代測，索取產品說明書

有效期：6個月

預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

保存溫度：2-8℃低溫保存

用途：科研實驗等領域科學研究，不得用于臨床診斷

種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等

運輸方式：現貨供應，一般為快遞運輸，江浙滬隔天到，外地及偏遠地方三至五天時間到貨。

由于我公司的試劑盒質量、價格等優勢得到了許多朋友們的認可，在這里上海酶遠也非常感謝您的合作支持。不過因科研實驗室所用比較特別，有很多朋友們誤以為我們所銷售的是藥品或者是用于臨床。

    不論何時，我公司的產品質量都會一如既往的保證zui，不會因為合作伙伴的增多而提高價格忽略質量！我公司的規定報價是非常公道的。

    上海酶遠“人ELISA試劑盒"可提供技術指導，也可以為您提供免費代測服務。售前、售中、售后的服務都非常的完善，而且種類全，質量問題無條件包退換。

標本要求：

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。

標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。

如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

生物素標記抗體的稀釋原則：

臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl)，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。

辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：

臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl)，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。

豬腸三葉因子(ITF)ELISA檢測試劑盒操作方法 

質粒提取原理:

質粒是細胞內的一種環狀的小分子DNA，是進行DNA重組的常用載體。作為一個具有自身復制起點的復制單位獨立于細胞的主染色體之外，質粒DNA上攜帶了部分的基因信息，經過基因表達后使其宿主細胞表現相應的性狀。在DNA重組中，質粒或經過改造后的質粒載體可通過連接外源基因構成重組體。

從宿主細胞中提取質粒DNA，是DNA重組技術中zui基礎的實驗技能。分離質粒DNA有三個步驟：培養細菌使質粒擴增，收集和裂解細菌，分離和純化質粒DNA。

 在質粒提取過程中，由于機械力、酸堿度、試劑等的原因，可能使質粒DNA鏈發生斷裂。所以，多數質粒粗提取物中含有三種構型的質粒：共價閉合環狀DNA（cccDNA）： 質粒的兩條鏈沒有斷裂；超螺旋開環DNA（ocDNA）： 質粒的一條鏈斷裂；松弛的環狀分子線形DNA（lDNA）： 質粒的兩條鏈均斷裂；線性分子質粒DNA的分子構型 。

質粒DNA瓊脂塘凝膠電泳模式圖可分為：松弛線性的DNA； 松弛開環的OC構型； 超螺旋的SC構型。由于瓊脂糖中加有嵌入型染料溴化乙錠，因此，在紫外線照射下DNA電泳帶成橘黃色。 道中的SC DNA走在zui前沿，OC DNA則位于凝膠的zui后邊；道中的L DNA 是經核酸內切限制酶切割質粒之后產生的，它在凝膠中的位置介于OC DNA 和 SC DNA 之間。

操作流程：

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制)，37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

僅供科研使用,不得用于臨床診斷。

可檢測樣本:體液（血清、血漿、唾液、胃液、尿液、細胞上清液、細胞裂解物等）,組織（肝臟、腎臟、心臟、脾臟等）,糞便以及天然孔排泄物,植物的根、莖、葉等組織液

酶遠生物博業生物科技有限公司是一家專門從事研究、生產、銷售elisa試劑盒、高保真KOD試劑盒、甲基化試劑盒、血清、抗體、甲基化亞硫酸氫鹽修飾通用試劑盒等生化試劑的綜合性公司,在行業發展中所承擔的角色是一種溝通科研和市場的媒介,我們致力為行業提供高品質的科研產品及專業的服務,為科研事業提供了有力的硬件支持,有效地促進了科研和市場需求的結合,更提高了科研成果的轉化效率,使得科研更具活力。

豬腸三葉因子(ITF)ELISA檢測試劑盒操作方法 

注意事項：

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

訂購流程：

1、您確認好了產品后可直接和我們在線，或者是，確認您購買的產品。

2、可以把您需要購買的產品確認好以郵件的形式發給我們，這樣您會在24小時內收到我們給您回復確認的郵件，或者是。

    郵寄（免運費）產品：現貨一般當天定購，隔天由倉庫統一出貨；期貨會在出貨前由專人通知，倉庫備貨，依其產品性能，路途等選擇進行包裝郵寄，客戶如有特別要求，可與銷售人員提前溝通。