鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

參數規格：

產地：國產/進口

規格：48T/96T

保存：2-8℃

檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

產品特點：運用免疫學技術測定標本的方法，該方法靈敏度高、特異性強、高重復好！

實驗方法：酶聯免疫法/酶免法（ELISA）凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可提供代測服務。

樣本類型：標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。每個標本量收集體積＝50ul×檢測種類。取材前可向銷售人員索要人血清剝奪反應相關蛋白elisa試劑盒說明書。

人血清剝奪反應相關蛋白elisa試劑盒樣本采集：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在2-4℃備用；如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。

標本要求：

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

ELISA試劑盒注意事項：

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（0.1-200ng/ml范圍內），乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。

7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。

8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。

9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

“ELISA試劑盒"實驗操作流程（具體請參照說明書）：

① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值我公司擁有完善的售前、售中、售后服務，以及實驗技術指導服務，歡迎您上海酶遠ELISA試劑盒，第二季度八五折優惠，可為您節省時間提供免費代測服務。

“ELISA試劑盒"特點：① 準確度高，靈敏度高，特異性強；② 檢測時間短；③ 操作簡便；④ 安全可靠，。

鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

ELISA標準操作及技術服務的常見問題分析：

一.ELISA 標準操作要點

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。

1. 標本的采取和保存

大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP 為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。一般說來，在5 天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。抗凝不*的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。

2.加樣

加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。

3.保溫

在建立ELISA 方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經

1-2 小時，產物的生成可達。為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應，邊上的值會偏高，建議為了客觀的判斷結果，將質控放在非邊緣位置。

4.洗滌

洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應步驟，但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。

洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質與固相載體的結合，并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質回復到水溶液狀態，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。

洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋，應按要求稀釋，所用的水電導率在1.5us/cm 之下，洗液如果結晶應待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40 秒左右，孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡。

5. 顯色和比色

TMB 經HRP 作用后，約40 分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2 小時后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24 小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指于測讀ELISA 結果吸光度的光度計。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優良的酶標儀的讀數一般可到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀器15-30 分鐘，測讀結果更穩定。

測讀A 值時，要選用產物的敏感吸收峰，如OPD 用492nm 波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不 移動ELISA 板的位置，zui終測得的A 值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

產品優勢：

選上海酶遠“ELISA試劑盒"，擁有質保價廉服務三重優勢！

優勢一：用途

1、將酶催化反應的放大作用和抗原抗體親和反應的高度專一性、特異性相結合，以酶標記的抗原或抗體作為主要試劑進行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。

2、實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。

3、其抗原抗體反應具有高度的特異性。

4、為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置

優勢二：質量保證，服務完善

1、上海酶遠代理RD/TSZ品牌酶聯免疫試劑盒，假一賠十，如有質量問題無條件包退換！

2、“人ELISA試劑盒"的售前售后服務都是非常完善的，而且我們提供免費代測服務，一周之內就能夠出結果。

優勢三：價廉

1、我公司產品價格合理公道，上海酶遠至今成立五年之久，為感謝朋友們支持，給到您7.8折優惠的！

2、每逢佳節美日我們都會展開不同的*活動以此表示感謝您的長期支持與信任。（主要形式有：買就送、滿就送、打折、降價等）

☉ 避免直接接觸終止液和底物。上海酶遠提醒：如不小心接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

☉ 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

☉ 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。