H.Pylori IgG ELISA

原理

• 間接法：將幽門螺桿菌抗原包被在微孔板表面，加入待檢血清樣本后，如果樣本中存在幽門螺桿菌特異性 IgG 抗體，抗體就會與包被的抗原結合。洗滌去除未結合的物質后，加入酶標記的抗人 IgG 抗體，它會與已結合在抗原上的 IgG 抗體結合，形成 “抗原 - IgG 抗體 - 酶標抗 IgG 抗體" 復合物。加入底物后，酶催化底物發生顯色反應，顏色的深淺與樣本中幽門螺桿菌 IgG 抗體的含量成正比。通過酶標儀測定吸光度值，與標準品或對照比較，即可判斷樣本中是否存在幽門螺桿菌 IgG 抗體以及抗體的含量。

操作步驟

• 樣本采集與處理：采集靜脈血，待血液自然凝固后，離心分離血清。血清樣本應在 2℃-8℃下保存，若不能及時檢測，需置于 - 20℃或更低溫度保存。

• 加樣：將標準品、陰性對照、陽性對照和處理后的樣本加入到包被有幽門螺桿菌抗原的酶標板孔中，通常每孔加入一定量的樣本或標準品，如 50μl 或 100μl，然后將酶標板放入 37℃恒溫箱中孵育一定時間，一般為 30 分鐘至 1 小時。

• 洗滌：孵育結束后，棄去孔內液體，用洗滌液沖洗酶標板，通常洗滌 3-5 次，以去除未結合的物質。

• 加酶標抗體：向每孔中加入酶標記的抗人 IgG 抗體，再將酶標板放入 37℃恒溫箱中孵育，時間一般為 30 分鐘左右。

• 再次洗滌：重復洗滌步驟，去除未結合的酶標抗體。

• 顯色：加入底物溶液，如四甲基聯苯胺（TMB），在酶的作用下底物發生顯色反應，一般在室溫下避光反應 15-30 分鐘，反應后溶液會呈現藍色。

• 終止反應：加入終止液，如硫酸溶液，終止顯色反應，此時溶液顏色由藍色轉變為黃色。

• 讀數：用酶標儀在特定波長下，如 450nm 波長處測定各孔的吸光度值。根據標準品的吸光度值繪制標準曲線，再根據樣本的吸光度值從標準曲線中計算出樣本中幽門螺桿菌 IgG 抗體的含量或判斷樣本的陰陽性。

臨床意義

• 診斷幽門螺桿菌感染：若檢測結果顯示血清中幽門螺桿菌 IgG 抗體陽性，表明患者曾經感染過幽門螺桿菌。但不能區分是現癥感染還是既往感染，因為幽門螺桿菌被gen除后，抗體水平下降緩慢，一般 1-2 年才能轉陰1。

• 流行病學調查：由于該檢測方法操作簡便、成本相對較低，可用于大規模人群的幽門螺桿菌感染流行病學調查，了解不同地區、不同人群的幽門螺桿菌感染率。

• 治療效果評估輔助：在幽門螺桿菌gen除治療后，定期檢測 H.Pylori IgG 抗體水平，若抗體水平逐漸下降，提示治療有效；若抗體水平持續不降或升高，可能提示治療失敗或存在再次感染，但不能僅以此作為判斷依據，還需結合其他檢查方法。