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供貨周期 | 一周 | 規格 | T25瓶/2冷凍管 |
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貨號 | YS873C | 主要用途 | 科研實驗 |
細胞名稱:CW-2人結腸癌細胞ATCC
細胞代次:P4
細胞規格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)
細胞凍存:無血清凍存液
細胞傳代:第一次建議1:2
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據,不提供照片默認收到狀態良好。(注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養基,另外一瓶用自己配的培養基,以便進行對比培養)
培養前的工作準備充分
包括耗材的處理、試劑的配置,無菌檢驗等等。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿(細胞瓶、裝營養液的瓶子、小青m素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水沖洗 10 遍,除去殘留酸液。瓶子之類,沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,160℃ 干烤 2 h 待用。
試劑配置。細胞培養用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調節。
無菌檢驗。主要采用過濾除菌:如抗生素、G-418 溶液、各類培養基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌,如 PBS、D-Hank's等。
試劑分裝保存
包括營養液、血清等。
血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃,如果一次無法用完一瓶,可將 40~50ml 分裝于無菌酸處理瓶中,甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌,不需再無菌過濾。若發現血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養基內一起過濾,勿直接過濾血清。(一般情況下不影響細胞培養)
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。
熱滅活是指 56℃,30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后,將血清放入,待溫度升高到 56℃ 后計時,一般 5 分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。
注意事項:有些細胞比較特殊,如貼壁不牢,在運輸過程中發生容易細胞脫落,這是正?,F象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(后期對比培養),沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養基終止反應。再離心,棄上清,加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),補充新的培養基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
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