上海雅吉生物公司代理銷售ATCC來源,sciencell來源,上海細胞庫來源等細胞銷售,另我公司有自建細胞庫,生產培養各類細胞系,采用灌注法制備各種原代細胞。
基因敲除細胞系構建服務:助力精準探索與技術創新
隨著基因組學和分子生物學的快速發展,基因敲除技術已成為探索基因功能、研究疾病機制和開發新藥的重要工具。基因敲除細胞系作為該技術的核心產品之一,廣泛應用于學術研究、藥物篩選及疾病模型的構建等領域。今天就為大家分享一下基因敲除細胞系構建流程。
基因敲除常用于研究基因在細胞功能中的作用。下面是常用的基因敲除細胞系構建方法和步驟:
插入突變(Knock-in):通過轉基因技術將外源DNA片段插入至目標基因位點,使目標基因發生突變而實現基因敲除的目的。這個過程通常需要克隆目標基因的編碼序列,并將突變(例如終止密碼子)或熒光標記等片段插入其中。
CRISPR/Cas9敲除:利用CRISPR/Cas9系統,設計合成質粒(sgRNA和Cas9蛋白),導入靶向基因組并誘導DNA雙鏈斷裂。通過細胞自我修復機制(非同源末端連接或同源重組),實現對靶向基因的敲除。
基因敲除細胞株核心優勢
1 高效基因編輯:雙sgRNA策略,敲除效率>90%
2多癌種覆蓋:18種標準化腫瘤細胞模型(下表)
3 嚴格質控:STR鑒定、支原體檢測、測序驗證
4快速交付:現貨細胞5個工作日內發貨,定制服務6-8周
技術參數
參數規格
驗證方法Sanger測序 + Western Blot
敲除效率>90%(測序驗證)
脫靶率<0.1%(全基因組脫靶分析)
傳代穩定性≥15代(基因型穩定)
基因敲除細胞株實驗注意事項
1.細胞選擇:優先使用 腫瘤細胞系(如HEK293、HepG2),永生細胞系可能因高拷貝數導致敲除困難。
2.驗證方法:基因組水平:PCR擴增靶位點+Sanger測序。
3.蛋白水平:Western Blot檢測SDK1蛋白是否缺失(需選擇大片段敲除避免假陰性)。支原體檢測:避免污染影響實驗結果。
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