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上海雅吉生物科技有限公司

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免疫組化實驗過程中出現的常見問題分析

閱讀:592      發布時間:2024-7-31
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1. IHC實驗結果顯色過深


一抗濃度過高或孵育時間過長——降低一抗濃度或減少孵育時間


孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育


2. 實驗結果存在非特異性顯色


石蠟切片脫蠟不干凈——延長脫蠟時間


蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間


組織富含內源性生物素與過氧化物酶——使用相關試劑進行封閉


3. 實驗結果顯色弱或無染色


一抗濃度過低或孵育時間過短——增加一抗濃度或延長孵育時間


組織中無目的抗原的表達


一抗種屬來源與二抗不匹配


注意事項


切片脫蠟和水化要充分,加反應液時要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時防止干片。


一抗的沖洗原則:單獨沖洗,防交叉反應污染;溫柔沖洗,防止切片脫落;推薦浸洗方式。


有條件的話最好立即拍照,若不能及時拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。


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