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選對轉印膜，Western離成功又進一步
閱讀：502 發布時間：2016-3-4為了獲得一個漂亮的western blot結果，大家也是蠻拼的。一抗、二抗、封閉、顯色，各種優化。轉印膜，大家好像不太在意。一般都是實驗室里有什么，我就用什么。NC、PVDF，。殊不知，這小小的一塊膜也與zui終的結果息息相關。如何選擇zui合適的轉印膜，小編來給你支兩招。
NC膜vs. PVDF膜
硝酸纖維素（NC）膜和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜是westernblot中zui常用的兩種膜。NC膜是zui早用于westernblot的膜，它的優點在于容易被乙醇溶液潤濕，同時產生不錯的結果。PVDF膜在1985年被開發出來，在嚴苛條件下表現出更高的蛋白保留，比如有機溶劑存在時，或者在酸性或堿性條件下。
與NC膜相比，PVDF膜有著更高的機械強度和出色的化學穩定性，因此適合多次剝離（stripping）和反復檢測（reprobing）。同時，PVDF膜也有著更高的結合能力。NC膜的典型結合能力是80μg/cm2，而PVDF膜達到150-160μg/cm2，這意味它的靈敏度更高。由于PVDF膜的疏水性，它成為疏水蛋白質（如膜蛋白）的。也正因為如此，PVDF膜在使用前需要一個簡短的甲醇潤濕步驟。
PVDF膜也有講究
看到這里，也許你準備打訂購PVDF膜了吧，別急，這里面的學問還不少。同樣是PVDF膜，它們的性質也有不同。以Pall生命科學的FluoroTrans家族為例，盡管這些PVDF膜都具有高的蛋白結合能力，但它們有著不同的側重點。
FluoroTrans PVDF膜是為N端蛋白測序而優化的，具有高的吸附能力，高的蛋白保留能力以及對于化學溶劑的抗性。它的孔徑約為0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除，即使是用強烈的離液鹽。此外，它的熒光背景極低，適合熒光免疫檢測。
若是開展westernblot，FluoroTrans W PVDF膜則是*。它有著*的靈敏度、出色的分辨率，在所有檢測系統中都表現出非常低的背景水平。此外，它用結合能力和保留能力上的一點點犧牲，換取了轉移過程中極低的蛋白穿透。這種膜的通用性也很好，對10 kD的小蛋白和>100 kD的大蛋白都適用。因此，你不需要在實驗室里準備0.2 µm和0.45 µm兩種孔徑的膜，只要這一種0.2 µm的膜就夠了。
各種包裝
轉印膜通常以各種包裝形式提供，比如FluoroTrans W PVDF膜，Pall就提供了一大卷的膜和各種預切膜。相比之下，一大卷（26 cm x 3.3 m）當然更經濟實惠，用多少切多少，不過要麻煩一點。各種大小的預切膜（7 x 9 cm、10 x 15 cm或20 x 20 cm）則省時省力，只是不太省錢。
使用小貼士
BSA通常作為NC膜的封閉液，但是對于PVDF膜，它的封閉效果并不好。因此，Pall建議，在封閉PVDF膜時選用0.5%的酪蛋白（Casein）。具體操作如下：將酪蛋白加入緩沖液中，然后在加熱板上加熱至80℃或直到溶解；不要煮沸溶液。在使用前冷卻至25-40℃。
另外，不要讓膜在檢測過程中的任何時間點干透，如果膜部分變干，可以讓膜*干掉，然后用甲醇重新潤濕，之后用緩沖液浸泡，繼續操作。如果你對PVDF膜或westernblot過程還有其他問題，我們。
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