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ONPG

MCE 國際站：ONPG

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-15926

CAS：369-07-3

中文名稱：2-硝基苯基 β-D-半乳吡喃糖苷

Synonyms：2-硝基苯基 β-D-半乳吡喃糖苷; 2-Nitrophenyl β-D-galactopyranoside

純度：99.84%

存儲條件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶劑中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：ONPG 是一種比色和分光光度計底物，用于檢測 β-半乳糖苷酶活性。

生物活性：ONPG 是一種用于檢測 β-半乳糖苷酶活性的比色和分光光度底物。 體外該酶對 ONPG 顯示出高水解能力 (100%)，對其天然底物乳糖 (25.7%) 顯示出中等活性。然而，該酶對所有其他顯色硝基苯基類似物的水解能力非常弱，表明 Gal308 是一種具有窄底物特異性的 β-半乳糖苷酶。研究重組酶的動力學參數、Michaelis-Menten 常數 (K_m)、轉換數 (k_cat) 和催化效率 (k_{cat< /sub>/Km) 的 Gal308 用于 ONPG 和乳糖。 ONPG的kcat和Km值為464.7±7.8 s^-1和2.7±0.3 mM，ONPG為264.2±2.1 s-1 和 7.1±0.8 mM。 ONPG酶的kcat/Km值(172.1 s^-1mM^-1)為比乳糖高4.6倍（37.2 s^-1mM^-1），清楚地表明Gal308對ONPG的催化效率遠高于乳糖^[1]。}

激酶實驗：本研究使用 ONPG 和乳糖兩種底物來測量 β-半乳糖苷酶活性。通過跟蹤 ONPG 釋放的鄰硝基苯酚的量來測量 ONPG 的 β-半乳糖苷酶活性。反應混合物由 100 μL 酶溶液和 400 μL ONPG 溶液（2.5 g/L，100 mM Tris-HCl 緩沖液，pH 6.8）組成。在 78°C 下孵育 15 分鐘后，通過添加等體積的 1 M Na2CO3 終止反應。通過測量 A405 定量測定釋放的鄰硝基苯酚。一個活性單位定義為在測定條件下每分鐘產生 1 μmol 鄰硝基苯酚所需的酶量。比活度以每毫克蛋白質的單位數表示。乳糖活性測定在含有 100 μL 酶溶液和 5% 乳糖的相同緩沖液中進行，煮沸 10 分鐘終止反應，使用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶測定試劑盒測定葡萄糖濃度。通過測量 A492 定量測定釋放的葡萄糖。一個酶活性單位定義為每分鐘釋放 1 μmol 葡萄糖所需的活性量[1]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Zhang X, et al. Metagenomic approach for the isolation of a thermostable β-galactosidase with high tolerance of galactose and glucose from soil samples of Turpan Basin. BMC Microbiol. 2013 Oct 24;13:237. doi: 10.1186/1471-2180-13-237.