寡糖鏈結構分析檢測技術服務詳情介紹

糖基化對于生物制品的療效、穩定性和免疫原性具有重要的影響。其中，寡糖譜和糖鏈結構是評估生物制品特性的重要指標。寡糖作為一種重要的碳水化合物，參與多種細胞生命過程，如蛋白質折疊和信號轉導。此外，寡糖常與蛋白質結合形成糖蛋白。糖蛋白常位于細胞表面，參與細菌和病毒的識別，以及與凝集素等其他蛋白質的相互作用，對于生物制品正常功能的實現至關重要。

寡糖的合成不是通過模板的方式進行的，并且呈現出樹狀結構，這增加了寡糖結構解析的難度。為此，百泰派克生物科技BTP開發了一系列穩定、高效的液相色譜高分辨質譜（LC-MS/MS）表征方法。這些方法涵蓋了從糖鏈分析、糖基化位點鑒定，到糖肽解析的完整分析流程。通過這些方法，我們能夠有效地研究和解析寡糖的結構和功能特性，從而更好地理解糖基化對生物制品的影響。糖基化分析基本流程圖如下所示：

圖1 糖基化分析流程圖

基本原理

寡糖鏈的分析通常借助液質聯用的高分辨質譜平臺。首先，使用PNGase F糖苷酶將糖鏈從糖蛋白上水解。隨后，采用2-AB試劑對水解后的糖鏈進行衍生化標記。標記完成后，將糖鏈樣品注入液相色譜高分辨質譜平臺，進行數據采集。通過糖鏈分析軟件，對采集到的質譜原始數據進行結構解析。

在分析過程中，液相色譜設備配備了熒光檢測器，可用于糖鏈的定量。同時，串聯的高分辨質譜系統用于對糖鏈結構進行解析和鑒定。這些分析方法結合了質譜和色譜技術，能夠有效地揭示寡糖鏈的結構和特性。

圖2 實驗流程

實驗儀器

HILIC-UHPLC/AB SCIEX 5600+

實驗結果展示

基于HILIC-UHPLC-MS/MS的N糖分析是目前主流的分析方法。親水相互作用色譜法（HILIC）被用于N糖的分離。通過PNGase F酶的反應，N糖被釋放出來。隨后，利用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）對釋放的糖鏈進行衍生化。這種衍生化使得大量樣本的N糖得以分析。衍生化后的N糖通過HILIC-UHPLC-MS進行檢測。zuì后，通過使用專門的軟件進行全自動結構解析，得到檢測結果。這種方法能夠高效地進行N糖的分析，為研究N糖的結構和特性提供了有效的手段。得到的N糖糖型及糖鏈結構解析結果如下展示：

圖3 樣品的N糖糖型

圖4 樣品的N糖糖型對應的糖鏈結構

*以上為質譜數據經過軟件解析得到的糖型及糖鏈結構。

常見問題

問題1：寡糖結構的常用表示方式是什么？

回答：寡糖結構的常用表示方式為：

問題2：熒光檢測器和質譜的作用分別是什么？

回答：熒光檢測器主要用于檢測熒光信號的強度，可用于定量分析。在糖基化分析中，熒光檢測器通常用于定量測定糖鏈的含量，因為糖鏈經過衍生化標記后，具有熒光特性，熒光信號的強度與糖鏈的含量成正比。

質譜主要用于測定分子的質量和結構信息。在糖基化分析中，質譜可用于確定糖型，即分析糖鏈的組成和序列，以及確定修飾位點和修飾效率。通過質譜技術，可以獲取糖鏈的質量信息，如分子量、碳水化合物的組成以及修飾的位置等重要參數。

熒光檢測器和質譜在糖基化分析中通常是同時采集的。熒光檢測器提供了定量測定糖鏈含量的信息，而質譜提供了糖型的結構信息。綜合利用這兩種技術，可以確定糖蛋白的糖型和比例，從而更全面地了解糖基化的特征和影響。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100%的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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