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單克隆抗體從頭測序檢測技術服務詳情介紹
單克隆抗體分子在藥物研發、診斷試劑開發中扮演了關鍵的角色。抗體分子本身的一級結構,特別是其CDR區域的氨基酸序列是發揮其生物學功能的核心,對其完整序列準確快速的分析具有十分重要的意義。例如對市場上已有的抗體產品直接進行序列分析是開發抗體藥物,抗體診斷試劑和其它抗體產品的捷徑;許多商業可得的抗體對于藥物靶點有中和活性,通過單抗序列測定得到該抗體的一級序列,可以以此為基礎可進行抗體親和力提升和人源化來開發抗體藥物;在進行抗體仿制藥物研發過程中,原研藥本身準確的一級結構信息是進行抗體仿制藥研發的基礎和前提。
百泰派克公司基于先進的高分辨率質譜儀Obitrap Fusion Lumos,結合豐富的生物信息學分析經驗,建立了全新一代抗體測序平臺,實現對抗體一級結構快速準確的分析。該平臺適用于不同亞型抗體(例如IgG和IgM)和不同類型抗體(熒光偶聯抗體,固定化抗體,不同物種的抗體)的序列分析。
單克隆抗體從頭測序服務流程
1. 單抗輕重鏈肽段全序列覆蓋
在進行抗體序列測定過程中百泰派克會選擇5種不同的蛋白酶進行酶切,利用不同酶切肽段之間的互補性實現抗體分子輕重鏈100%全序列的拼接。而對于抗體核心區域CDR序列在進行序列分析過程中要求至少被鑒定到10次,以此來充分保證測序結果的準確性(如下圖所示)。
單克隆抗體從頭測序2
2. 先進的數據處理算法
百泰派克基于發表在Nature Biotechnology和專業的蛋白組學雜志JPR上的文獻,結合現有的專業進行抗體序列分析的軟件PEAKS Mass Spectrometry Software,開發了自己的質譜原始數據計算方法,采用寬進窄出的原則,在不遺漏任何有效數據信息的同時實現了抗體序列的準確鑒定。
3. 高精度和準確性
百泰派克在測序過程中會使用目前分辨率和高靈敏度Orbitrap Fusion Lumos質譜儀;與老一代的質譜儀(例如Obitrap Elite、Q Exactive等)相比,Lumos在提高了一級二級質譜掃描速度的同時保證肽段分子量的準確性;一級質譜掃描速度的提高,有助于同一個肽段可以更多次的被鑒定到,提高了結果的可信性;二級質譜掃描速度的提高可以更好的進行片段碎裂(如下圖所示),從而保證結果的準確性,并可以通過二級碎裂片段的特征峰實現Liangansuan和異Liangansuan的準確判定。
單克隆抗體從頭測序3
4. 可對多種亞型和不同類型的抗體進行測序
我們建立的技術平臺不受小基團(如FITC、Biotin、Alexa)的影響,雖然較大的蛋白基團會給測序帶來難度,但若提供較高濃度的蛋白仍可成功測序。
5. 嚴謹的序列預測和嚴格的序列驗證
我們對測序的結果會首先進行序列的預測,標明抗體的CDR區域(如下圖所示);同時,我們還會以測定的序列建立新的數據庫,采用Sequence Confirmation的模式對采集到的質譜數據再次進行分析,只有wán quán匹配的結果我們才會提供給客戶。
單克隆抗體從頭測序4
在技術報告中,百泰派克生物科技會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告,報告包括:
1. 實驗步驟(中英文)
2. 相關的質譜參數(中英文)
3. 質譜圖片
4. 原始數據
5. 肽段序列信息
6. 抗體序列信息
從頭測序
蛋白從頭測序
多肽從頭測序
基于質譜的序列分析
基于Edman降解的蛋白質N端測序
基于PCR擴增的單克隆抗體測序服務
基于Top down自上而下法的蛋白質測序
蛋白測序
多肽測序
抗體測序
單克隆抗體從頭測序檢測技術服務詳情介紹
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