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平行反應(yīng)監(jiān)測(Parallel Reaction Monitoring, PRM)是一種基于高分辨率、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)測技術(shù)。該技術(shù)的原理與SRM/MRM相當(dāng),但在蛋白質(zhì)和肽的juéduì定量測定開發(fā)中更方便。它zuì適合通過阿托摩爾水平檢測對復(fù)雜樣品中的多種蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。PRM技術(shù)是一種新型的無抗體蛋白驗證技術(shù),用于對label free、iTRAQ、TMT、SILAC等相對定量蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)進(jìn)行驗證,或者對復(fù)雜樣品中的目標(biāo)蛋白進(jìn)行靶向定量分析。
PRM分析原理
PRM基于Q-Orbitrap作為代表性的四極桿高分辨率質(zhì)譜平臺。與一次執(zhí)行一個躍遷的 SRM 不同,PRM 對前體離子的每個躍遷執(zhí)行全掃描,即并行監(jiān)測前體離子的所有碎片。首先,PRM采用四極桿(Q1)選擇母離子,選擇窗口通常為m/z≤2;然后,前體離子在碰撞室(Q2)中碎裂;zuì后,Orbitrap 取代了 Q3,以高分辨率和高精度掃描所有產(chǎn)物離子。因此,PRM技術(shù)不僅具有SRM/MRM目標(biāo)的定量分析能力,而且還具有定性能力。(1)質(zhì)量精度可達(dá)ppm級,比SRM/MRM更能消除背景干擾和假陽性,有效提高復(fù)雜背景下的檢出限和靈敏度;(2) 產(chǎn)物離子全掃描,無需選擇離子對和優(yōu)化裂解能,更容易建立分析;(3)更寬的線性范圍:提高到5-6個數(shù)量級。
圖1
基本構(gòu)成
質(zhì)譜的基本原理是利用質(zhì)譜儀將樣品中的分子離子化,并根據(jù)它們在磁場中的質(zhì)量/電荷比(m/z)分離和檢測。其基本構(gòu)成包括:
1.離子源(Ionization Source):
將分析樣品中的分子轉(zhuǎn)化成離子的裝置。常用的離子化方法包括電離、化學(xué)離子化、激光脫附等。
2.質(zhì)量分析器(Mass Analyzer):
根據(jù)分子的質(zhì)量對其進(jìn)行分離和篩選。常見的質(zhì)量分析器包括飛行時間質(zhì)量分析器、四極質(zhì)量分析器、離子阱等。
3.檢測器(Detector):
用于測量離子流的強度和質(zhì)量。檢測器可以是光電倍增管、電子倍增器等。
4.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(Data System):
用于記錄和處理質(zhì)譜數(shù)據(jù),通常與計算機系統(tǒng)連接,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和解釋。
PRM技術(shù)亮點
在高通量檢測過程中,保證定量的靈敏度和特異性。
與SRM相比,它不需要母離子/碎片離子對,只需要母離子信息,使得實驗設(shè)計更加簡單。
它可以通過二次全掃描進(jìn)行定性和定量分析,在復(fù)雜背景下表現(xiàn)出強大的抗干擾性和高分辨率。
可以根據(jù)需要選擇性地?fù)饺牒铣傻臉?biāo)準(zhǔn)肽,從而節(jié)省實驗成本。
PRM技術(shù)具有出色的重現(xiàn)性,確保多次重復(fù)測試結(jié)果的穩(wěn)定性。
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