土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（Soil-Fluorescein diacetate，S-FDA）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
FDA 水解反應能很好的反應土壤中微生物活性和土壤質量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質的轉化，是土壤質量研究中的重要生物學指標之一。
測定原理：
FDA 是一種無色化合物，在介質中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應，產生酶解終產物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得FDA 水解酶活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
標準液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4mL 試劑三溶解。
試劑三：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理：
稱取風干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。
測定操作表：
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
樣本（g） | 0.05 | 0.05 | ||
標準液（μL） | 40 | |||
雙蒸水（μL） | 40 | |||
試劑一（μL） | 200 | 200 | 240 | 200 |
試劑二（μL） | 40 | |||
充分混勻，30℃，震蕩 1h | ||||
試劑三（μL） | 160 | 160 | 160 | 160 |
10000g，25℃，離心 5min，取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸 光值A，△A1=A 標準管-A 空白管，△A2=A 測定管-A 對照管 | ||||
注 意：空白管和標準管只需測定一次。
酶活性計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
C 標準品：
標準品濃度 100μmol/L；V 反總：反應總體積，0.4mL；W：樣本質量，g
注意事項：
1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準確反映酶的活性。
2.測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請進行適當?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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