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真核細胞轉染操作步驟2021/11/29
一些真核蛋白在原核宿主細胞中的表達不但行之有效而且成本低廉，然而許多在細菌中合成的真核蛋白或因折疊方式不正確，或因折疊效率低下，結果使得蛋白活性低或無活性。不僅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻譯后加...
胎牛血清使用前的保存方法2021/11/29
今天小編為大家帶來的胎牛血清使用前的保存：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的...
教您如何簡易辨別胎牛血清2021/11/29
影響胎牛血清質量的因素主要有：血源、內毒素、總蛋白含量、血紅蛋白、pH、微生物、免疫球蛋白等等，那么如何簡易快速的辨別血清質量的好壞呢？拿到血清，最先接觸的是血清外觀，外觀的判斷尤為重要，可以讓我們粗...
細胞轉染的方法2021/11/25
細胞的轉染方法細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變...
關于細胞轉染實驗，這幾點必須要清楚2021/11/25
細胞轉染是指將外源分子如DNARNA等導入真核細胞的技術。可分為瞬時轉染，穩定轉染等瞬時轉染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續...
90%的人在進行細胞轉染實驗時，幾乎忽略了這6點注意事項！2021/11/25
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學介導方法：如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法：有較為原始的原...
細胞轉染總是失敗？一文教你如何做好細胞轉染實驗2021/11/25
細胞轉染技術是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。其在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等實驗和應用中使用越來越廣泛。然而，轉染效率低下卻一直是科研工作者們經常遇到的一大難...
細胞轉染實驗效率低如何破?2021/11/25
細胞轉染效率低如何破?細胞轉染是細胞生物學和分子生物學的一種常用的技術手段。而轉染效率低卻是實驗科研者經常遇到的問題，尤其是原代細胞轉染，更是因為難度大，號稱誰碰誰死，而令人談虎色變。不，應該是談原代...
如何做核提取物制備優化？2021/11/24
材料與儀器轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）高鹽緩沖液分別含0.8、1.0、1.2、1.4及1.6molLKCl貝克曼JS4.2轉子或相當的轉子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的...
核提取物的制備方法2021/11/24
材料與儀器轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉子或相當的轉子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物...
如何做非肌肉肌球蛋白的層析純化？2021/11/24
材料與儀器非肌肉肌球蛋白勻漿緩沖液肌動蛋白聚合緩沖液凝膠過濾羥基磷灰石緩沖液GFHT緩沖液大容量轉頭步驟高速離心和DEAE層析1.用不含除了PMSF以外的蛋白水解抑制劑的勻漿緩沖液平衡DEAE纖維素，...
細胞勻漿的操作2021/11/24
材料與儀器細胞緩沖鹽溶液二異丙基氟瞬酸勻漿緩沖液相差顯微鏡步驟1.準備下面的貯液和材料。等滲的緩沖鹽溶液（例如PBS，150mmol/LNaCl；10mmol/LNaPO4，pH7.2)二異丙基氟瞬酸...
從培養的細胞中純化總RNA的方法2021/11/24
材料與儀器細胞RNA提取緩沖液變性液水飽和酚培養皿Falcon2063管步驟1.取1個細胞已長滿的100ml培養皿，吸出培養液，加2mlRNA提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細胞。RNA提取緩沖液：變性液，...
純化質粒（堿裂解法）2021/11/18
材料與儀器大腸桿菌LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀離心管步驟1.單個大腸桿菌克隆接種到2ml含適當抗生素的LB中。37℃劇烈振蕩孵育5~8小時。或者可以培養過夜使飽和。2.倒1.5ml培養液到已作標記的微量離心...
基因組DNA的快速純化方法2021/11/18
材料與儀器尾部緩沖液蛋白酶K離心管玻璃棒步驟第1天1.大約1.5cm長的尾部活檢樣品放在一個1.5ml盛有0.7ml尾部緩沖液的小離心管中，加35ul10mg/ml蛋白酶K，在55℃振搖溫育過夜。尾部...
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