常見問題分析：

不長克隆

1. 片段類型錯誤：只兼容 PCR 擴增產物，且引物 5’端不可磷酸化修飾；
2. 片段投入不符合要求：片段應當切膠回收，且回收濃度不低于 30ng/μl；濃度過高時需稀釋使用，保證體系各組分投入體積不小于 1μl；片段投入量應按照說明書公式計算；
3. 連接反應不適當：反應應在 PCR 儀中進行，溫度可設置 25 或 37°C，連接時間可從 5min延長至 30min。

空載體 / 假陽性
1. PCR 擴增產物不單一：優化 PCR 體系，提高特異性；對目的片段切膠回收；鑒定更多單克??；
2. 片段投入不符合要求：片段應當切膠回收，且回收濃度不低于 30ng/μl；濃度過高時需稀釋使用，保證體系投入體積不小于 1μl；片段投入量應按照說明書公式計算；
3. 連接反應不適當：反應應在 PCR 儀中進行，溫度可設置 25 或 37°C，連接時間可從 5min延長至 30min；
4. 菌液 PCR 用酶不適合：PCR 酶活應當不受雜質影響，引物不應選擇插入片段 PCR 用引物進行檢測。

測序突變
1. 測序克隆數過少：測序單克隆數只有 1 個時，測序信息部分可信，建議多測幾個單克隆，檢查突變處的測序信號是否有問題，突變是否從模板引入；
2. 突變位置：若堿基突變位于引物處，建議重新合成引物再次實驗；位于其他部位的突變，應當使用高保真酶重新制備模板再次實驗。

測序片段不正確
1. PCR 擴增產物不單一：優化 PCR 體系，提高特異性；對目的片段切膠回收；鑒定更多單克?。?br role="presentation" style="padding: 0px; margin: 0px; color: transparent; position: absolute; white-space: pre; cursor: text; transform-origin: 0% 0%;"/>

2. 模板存在 Amp/kana 抗性的質粒：對目的片段進行切膠回收。

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深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務?？梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務