高效率轉染人淋巴瘤細胞的操作方法

時間：2021/11/11閱讀：1456

轉染條件：

培養板：6孔板

轉染試劑用量：10ul

核酸用量：電訊

轉染時間：48小時

高效率轉染效果圖如下：

高效率轉染人淋巴瘤細胞的操作方法

操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉染。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜止 10-15 分鐘。

在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉染過程中不用換液。

分析結果：質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。

注意事項：

1、質粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質粒轉染效率會下降 80%左右，甚至會轉染失敗。

2、質粒必須去除內毒素，內毒素對細胞將產生很大的細胞毒性，會導致轉染效率下降 70%-80%左右，甚至導致轉染失敗（推薦使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內毒素質粒提取試劑盒）。

3、復合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉染試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進行了稀釋會導致轉染失。

4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養板。

5、轉染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時后換液。

6、原代細胞、免疫細胞轉染時，細胞基礎培養基里面不能含有雙抗培養基。

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