国产在线无码视频一区_免费看片A级毛片免费看_国产午夜福利精品一区二区三区_99久久人妻精品免费一区

深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細胞轉染
支原體清除
細胞凍存
實驗耗材
分子試劑
細胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學發光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細胞生物學
Corning康寧
解離試劑
細胞類-實驗耗材
原代細胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細胞系
生化試劑盒
環境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質
細胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列
修飾檢測試劑盒

用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標記哺乳動物細胞的方法

時間:2021/11/8閱讀:2354
分享:
材料與儀器

細胞
培養基

實驗步驟

1. 制備活躍生長著的細胞。從單層培養細胞(約鋪滿 75% 表面積)中吸去培養基。用預熱至 37℃ 的無血清培養基沖洗兩次(培養基中應該不含蛋氨酸和半胱氨酸)。對于懸浮培養細胞,通過 400 g 離心 5 分鐘收集細胞。用頂熱至 37℃ 的無蛋氨酸培養基重懸沉淀,400 g 離心 5 分鐘。盡可能地去掉上清,用無蛋氨酸培養基重懸細胞至 107 細胞/ml 后轉移至一塊小培養板。

2. 加入預熱的無蛋氨酸和半胱氨酸的培養基,于 37℃ 培養 20 分鐘,以耗盡胞內含硫氨基酸庫。

3. 吸去培養基,立刻換上預熱的、無蛋氨酸和半胱氨酸何含有適量標記氨基酸的新鮮培養基,依據預實驗結果,將細胞于 37℃ 培養一定時間(對于末做過預實驗的蛋白質,以 2~4 小時作為初始值比較合適)

4. 移去放射性培養基。對于單層培養細胞,吸出即可。懸浮培養細胞則可轉至試管,400 g 離心 5 分鐘,倒去上清。

5. 準備一塊凍至 0℃ 的平板(如放在冰盒上的鋁板),將單層細胞培養板放上去。用冰冷的 PBS 沖洗兩次,沖洗液都到進放射性廢料桶。懸浮培養細胞用 PBS 重懸,400 g 離心 5 分鐘,倒去上清。

6. 抽干細胞上殘留的 PBS,裂解細胞。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 方正县| 芜湖县| 哈巴河县| 三门县| 福贡县| 阳新县| 习水县| 余干县| 扶沟县| 叙永县| 定南县| 准格尔旗| 姜堰市| 马尔康县| 黑河市| 沧源| 克东县| 大城县| 长阳| 永福县| 定边县| 汤原县| 平乡县| 长子县| 安新县| 大石桥市| 汤原县| 平乡县| 吴川市| 凤凰县| 奈曼旗| 招远市| 左权县| 南澳县| 当涂县| 巴里| 晋江市| 蛟河市| 黄梅县| 长岛县| 抚顺市|