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蛋白印跡儀的使用規(guī)范與注意事項(xiàng)

閱讀：342 發(fā)布時(shí)間：2025-3-24

　　蛋白印跡儀(Western Blot System)是一種用于檢測(cè)和分析特定蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。其原理包括聚丙烯酰胺凝膠電泳(分離蛋白質(zhì))、轉(zhuǎn)膜(將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體，如NC膜或PVDF膜)、抗體孵育(特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合)、顯色反應(yīng)(標(biāo)記的二抗與底物反應(yīng)，顯示目標(biāo)蛋白)。

　　蛋白印跡儀廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究(如蛋白質(zhì)表達(dá)分析、細(xì)胞信號(hào)通路研究)、臨床診斷(如HIV感染確認(rèn)、自身免疫性疾病檢測(cè))、藥物研發(fā)(如生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、蛋白質(zhì)相互作用研究)等領(lǐng)域。其優(yōu)勢(shì)在于高靈敏度和特異性，能夠定量和定性分析蛋白質(zhì)。

　　使用規(guī)范與注意事項(xiàng)：

　　1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

　　樣本需充分裂解，定量后上樣(避免過(guò)載導(dǎo)致條帶模糊)。

　　預(yù)制膠需平衡至室溫，避免冷凝水影響電泳。

　　2、轉(zhuǎn)膜優(yōu)化：

　　PVDF膜需甲醇激活，NC膜需緩沖液浸潤(rùn)。

　　轉(zhuǎn)膜時(shí)間根據(jù)蛋白分子量調(diào)整(如100kDa蛋白需1.5小時(shí))。

　　3、抗體孵育：

　　一抗?jié)舛刃桀A(yù)實(shí)驗(yàn)確定，4℃過(guò)夜孵育效果佳。

　　二抗需避光保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　4、設(shè)備維護(hù)：

　　定期清潔電泳槽和轉(zhuǎn)印電極，防止蛋白殘留。

　　校準(zhǔn)成像系統(tǒng)的光強(qiáng)和曝光時(shí)間，確保定量準(zhǔn)確性。

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