參考價	￥80
訂貨量	1 件

產品簡介

應用領域	醫療衛生,生物產業

免疫熒光（雙標）服務，在同一組織細胞標本上需要同時檢測兩種抗原時，需進行雙重熒光染色。雙重免疫熒光標記法(double immunofluorescence labeling method)也分為直接法和間接法。

詳細介紹

實驗收費標準：

項目編號	項目名稱	計價單位	單價
ZC1071	免疫熒光（雙標）	張	80元

服務介紹：

免疫熒光（雙標）服務實驗結果展示：

1、冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復溫，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

2、修復：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

3、破膜：切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

4、加試劑1,2：按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現配現用），加到圈內覆蓋組織，切片平放于濕盒內，37℃恒溫孵育2小時，濕盒內加少量水保持濕度。

5、 BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min，在圈內滴加用3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

6、加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）

7、加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

8、 DAPI復染細胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。去除PBS后在圈內滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10、鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm；FITC綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm；CY3紅光激發波長510-560，發射波長590nm）

石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟