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近年來，由于多種*的原創生物制劑的保護期滿，生物仿制藥單克隆抗體 (mAb) 的開發和生產迅速增長。盡管不存在有關生物仿制藥的監管標準，但是業界一致認為生物仿制藥應當：(i) 與原創生物制劑具有高度生物物理和生物化學相似性，并且 (ii) 在純度、效價和安全性方面具有可比性[1]。美國 FDA 等監管機構指出，可以使用高質量分析數據來證明范圍較窄的體內研究的合理性[2]，強調了全面的高分辨率分析表征的重要性。

與小分子藥物不同，mAb 極其復雜，難以實施完整的分析表征。因此，生物制藥公司將確定一組需要監測的關鍵質量屬性 (CQA)，選擇 CQA 的原則是它們對生物制劑的整體質量、安全性或有效性具有重大影響。由于同一工廠可能生產多種治療藥物，因此 mAb 身份（鑒定）是一種 CQA，其有效的測定方法是完整蛋白質質譜法。此外，糖基化通常也被視為一種 CQA，因為非人類多聚糖基序可能觸發急性或慢性過敏反應[3,4]。另外，由于 mAb 由培養的細胞產生，而多聚糖對培養條件的變化非常敏感，因此它們是生產工藝發生非預期變化的有用的指標。

本應用簡報分析了兩種利妥昔單抗生物仿制藥的完整質量數、亞基質量數和糖基化，并將它們與創新藥物分子進行了比較。我們使用四種不同的工作流程進行分析： (i) 完整 mAb，(ii) 還原態亞基，(iii) IdeS 酶解的亞基，以及 (iv) 游離多聚糖。在這些工作流程中，樣品前處理時間各不相同，有的無需樣品前處理（完整 mAb），有的需要大約三個小時（游離多聚糖）。包含更多樣品前處理步驟的工作流程的優勢通常在于對低豐度多聚糖組分具有更高的靈敏度，從而提高了相應技術的分析能力。

結果表明，由 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統和 Agilent 6545XT Q-TOF 組成的安捷倫高分辨率LC/MS非常適合執行這些分析。此外，利用 AssayMAP Bravo 自動完成游離多聚糖工作流程中的樣品前處理，從而減少人為錯誤并縮短樣品前處理時間。標記多聚糖可在小樣品量中以高濃度洗脫，無需冗長的干燥步驟。