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三重四極桿液質聯用儀用于親脂性海洋貝類毒素的高靈敏度可靠分析
閱讀：601 發布時間：2022-10-18前言海洋生物毒素是海洋植物藻類產生的次生代謝物，其濃度一般很低。在藻類生長時，毒素的濃度可以達到有毒水平，特別是雙殼類軟體動物中毒素的積累。在過去的二十年中，有害藻類大量繁殖，其數量和強度都日益增加，大量的有毒化合物在海洋食物鏈中被發現 [海洋生物毒素。糧農組織食品和營養文件（80）2004]。由于歐盟現有的標準方法中，小白鼠生物法的高變異性、低檢測能力和有限的特異性，歐洲食品安全局（EFSA）要求需要開發出更靈敏、更可靠的
您面對的挑戰目前的挑戰是需要尋找靈敏和可靠的分析方法用于海產品中親脂性的海洋毒素的測定，這些海洋毒素包括大田軟海綿酸（OA）、鰭藻毒素（DSP 毒素）、聚醚類毒素（如原多甲藻酸、蛤毒素和蝦夷扇貝毒素）。這種方法應該能夠擴展到親脂毒素（如軟骨藻酸、環亞胺毒素或螺旋內酯毒素）的進一步檢測。歐盟立法規定檢測限（LOD）應該低于原多甲藻酸、大田軟海綿酸和鰭藻毒素和蛤毒素的總和以及蝦夷扇貝毒素的最大殘留（MRL）?；|使得痕量毒素的定量和確認分析更加復雜。由于很多標準品很難得到，所以只能根據其它的毒素進行定量分析。
我們的綜合方法當前，海洋生物毒素的分析方法主要是基于物理化學技術，如液相色譜-串聯質譜。三重四極桿質譜能大幅減少或消除基質的干擾。多反應監測（MRM）是根據待測物的母離子在碰撞反應池產生特征離子，然后采集這些特征離子來完成檢測。而且，待測物母離子（MS1 設置成選擇離子掃描模式）與單四極桿質譜的選擇離子掃描的選擇性相同，生成的子離子（MS2 的選擇離子掃描模式）更有可能成為目標化合物的特征離子，這樣的模式能夠大大提高MRM 的選擇性。特征的子離子組合（更高的選擇性）和背景噪音的消除使得即使在復雜基質樣品中也能得到更低的檢測限。本文的方法中，使用安捷倫 6460 三重四極桿液質聯用儀和多反應監測（MRM）、安捷倫 1200 SL 快速高分離液相色譜以及MassHunter 工作站軟件，建立了貝類樣品中親脂性海洋生物毒素的高靈敏度和高選擇性的分析方法。本文介紹的樣品凈化方法非常簡單，因此很適合常規檢測。它可以用于 OA、DTX-1、DTX-2 的分析，包括水解后的脂、YTX、OH-YTX、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2 和 AZA-3。由于缺少某些商品化的毒素標樣，因此使用 CopyCalibrationLevel.quant.script 對其它的毒素化合物進行定量分析。
方法和運行用于海洋生物毒素的現代分析方法是基于三重四極桿液質聯用系統的技術。樣品前處理很簡單，只需要用溶液提取，然后過濾。液相色譜進行毒素的分離，然后用液相色譜-電噴霧離子源-串聯質譜（MRM正/負模式）進行待測物的定量分析。分析步驟液相萃取高效液相色譜，線性梯度進行分離液相色譜-電噴霧離子源-串聯質譜（MRM）用于毒素檢測樣品制備步驟稱取 2 g 熟的研磨貝類。加入 9 mL 甲醇溶液（80%）。進行兩次提取步驟。將兩次提取液混合在一起，移至 50 mL 容量瓶。取一定體積的樣品溶液，過濾（RC 0.45 µm），10 µL 樣品進到液相色譜-串聯質譜中進行分析。
液相色譜-串聯質譜方法親脂性海洋生物毒素的總分析時間小于30 min。分析方法中，對于 OA、DTX-1、DTX-2、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2和 AZA-3 采用正離子模式。YTX 需要用不同的色譜柱和流動相另外進行分析。提取物（10 µL）直接進到液相色譜-串聯質譜系統進行分析。對于液相色譜方法，正離子模式下用 0.1% 甲酸溶液（A）和甲醇（B）；對于負離子模式下用 2 mM醋酸銨溶液（A）和甲醇（B）。色譜柱（Phenomenex Luna 5 pm C18（2） 100 ?150 x 2.0 mm [正離子模式]，ZORBAXEclipse Plus C 8 4.6 x 75 mm 3.5 pm [負離子模式]），柱溫為30 °C，流速為0.2 mL/min。
結論通過國際合作研究進行方法驗證。合作研究是在 §64 LFGB 工作小組的“藻類毒素"框架下進行的，由聯邦消費者保護和食品安全（BVL)辦公室主辦。
