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氣質聯用儀測定生物樣品中的浴鹽
閱讀：598 發布時間：2022-7-28前言2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-戊酮 (PVP)和(Naphyrone) 是作為浴鹽銷售的策劃藥物。這些藥物是吡咯戊tong的類似物。它們由于被當作諸如 MDMA 等藥物的合法替代品而被濫用。這些化合物的使用已被注意到能夠導致心動過速、高血壓、刺激、極度恐慌發作和興奮性精神錯亂。本應用簡報描述了對全血血清、玻璃體液、尿液或組織勻漿標本的分析方法。分析中需要樣品的最少量為 3 mL。使用液液萃取法將 2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-戊酮 (PVP)、吡咯戊tong和 Naphyrone以及內標羅哌la因從堿化樣品萃取到有機溶劑中。使用乙酸乙酯復溶萃取物，然后進樣到四極桿離子阱氣相色譜-串聯質譜中進行分析。
實驗部分標準品和試劑試劑• 1-氯丁烷 (Nanograde)、乙酸乙酯、濃氨水 (NH4OH)、碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液 pH = 9.8（將 100 g 碳酸鈉與 50 g 碳酸氫鈉混合于 1000 mL 去離子水中，調節 pH 至 9.8）。在室溫下的穩定期為 1 年。• 濃鹽酸、甲醇（HPLC 級）、0.1% 鹽酸的甲醇溶液（將 0.1 mL濃鹽酸稀釋于 100 mL 甲醇中。在室溫下的穩定期為 1 年）。• Naphyrone 和吡咯戊tong儲備標準品（1 mg/mL 的甲醇溶液）購自 Cerilliant（儲存于冰箱中直至過期）。• PVP 儲備標準品購自 Cayman Chemical（10 mg 瓶裝），將所容物轉移至 10 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩定期為 2 年。• 羅哌ka因儲備標準品購自 Sigma (R0283)，使用甲醇將 11.9 mg標準品稀釋至 10 mL。在冰箱中的穩定期為 2 年。• 儲備標準品購自 Cayman Chemical，50 µL 乙酸甲酯中含 5 mg 標準品（在甲醇中稀釋至 5 mL）。儲存于冰箱中可穩定 1 年。• Naphyrone QC 儲備標準品（1 mg/mL 的甲醇溶液）購自Cerilliant。儲存于冰箱中直至過期。• 吡咯戊tong QC 儲備標準品購自 Cayman Chemical（100 µL 甲醇中含 5 mg 標準品），將所容物轉移至 5 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩定期為 2 年。• PVP QC 儲備標準品購自 Cayman Chemical，10 mg 瓶裝（將所容物轉移至 10 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩定期為 2 年）。
工作標準品、Naphyrone、PVP 校準中間標準品 15 µg/mL（將 150 µL 各儲備標準品加入 10 mL 燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。• Naphyrone、PVP QC 中間標準品 15 µg/mL（將 150 µL 各儲備標準品加入 10 mL 燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。• 工作內標物羅哌ka因 15 µg/mL（將 150 µL 儲備液加入 10 mL燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。在 2-8 oC 下儲存。穩定期為 1 年。
對照和校準標準品陰性對照 — 來自美國紅十字會的不含藥物的全血或收集的空白尿液。基質必須在使用前進行檢驗并判定不含藥物。當儲存于 -20 oC時，穩定期為 1 年。低對照 (125 ng/mL) — 根據需要在血液或尿液中現配，將 25 µLQC 中間標準品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。高對照 (500 ng/mL) — 根據需要在血液或尿液中現配，將 100 µLQC 中間標準品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。
樣品制備使用如下工作標準品和不含藥物的血液或尿液制作校準曲線：用移液管將 3 mL 樣品、陰性和陽性對照移取到帶標記的 16 ×100 mm 培養管內，加入 50 µL 工作內標物和 2 mL pH 9.8 的碳酸鹽緩沖液，向各管內加入兩滴 NH4OH，輕輕渦旋至均勻。向各管內加入 7.0 mL 1-氯丁烷，加蓋，然后旋轉所有管至少 10 min。在3,000 RPM 下將所有管離心 10 min。將有機層（頂層）移至干凈的帶標記 16 × 100 mm 培養管內。加入兩滴 0.1% 的鹽酸甲醇溶液，在 37 oC 下用氮氣蒸發至干燥。將用 200 µL 乙酸乙酯復溶干燥的萃取物轉移至具有內插管的自動進樣器樣品瓶，加蓋，然后轉到氣相色譜-串聯質譜中進行分析。
結果與討論下列標準用于確定吡咯戊tong類似物是否存在以及其含量。• 色譜分析結果可被接受（峰分辨率、峰對稱性、不存在交叉污染）。存在可用來定量和定性的選擇性離子。來自測試標本的假定吡咯戊tong類似物的保留時間大約在最近一次校準保留時間的 ± 2% 以內。• 使用類似物和內標物定量離子的面積進行定量分析。通過比較未知物和對照物的相對響應，并比較各校準物濃度的相對響應而產生的校準曲線來實現定量。陽性對照必須處于其靶標范圍內，陰性對照中不能有吡咯戊tong類似物存在。• 必須觀察到適當的 m/z 離子。測試標本和陽性對照必須在PVP、Naphyrone 和羅哌ka因內標各自的保留時間處表現出由 126 m/z 的電離所產生的 m/z 離子。• 使用雙離子比例法進行鑒定。對于PVP和 Naphyrone，將 m/z 離子峰 124 和 97 的豐度除以基礎離子峰 84 的豐度。計算得出的離子比例處于校準確定的靶標值的 20% 以內。
結論本應用簡報展示了一種使用羅哌ka因作為內標物來測定生物樣品中吡咯戊tong類似物的靈敏且穩定的選擇性方法。對于吡咯戊tong類似物的分析，氣相色譜四極桿離子阱串聯質譜的優勢不可低估。氣相色譜四極桿離子阱串聯質譜在減少樣品基質干擾、改善信噪比及其兼具高選擇性和靈敏性方面，為吡咯戊tong類似物的分析提供了可信度更高的解決方案。氣相色譜四極桿離子阱串聯質譜分析具有減少假陽性和假陰性的潛力，還能在所得的結果中實現更高的可信度。使用上文所列的優化方法，可將快速、靶向的氣相色譜-串聯質譜方法用于解決當前法醫實驗室所面臨的吡咯戊tong類似物分析難題。聯合使用陽性對照與陰性對照可確保在未知生物樣品中進行精確定量并排除假陰性。在多種樣品基質中均觀察到了針對吡咯戊tong類似物低至 ng/mL 的檢測限。