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安捷倫Infinity II 液相色譜系統分析三環抗抑 郁藥
閱讀：1109 發布時間：2022-1-6摘要：Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統中的安捷倫智能系統模擬技術 (ISET) 能更加方便地 將分析方法從 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統等傳統 HPLC 系統中進行轉移。本應 用簡報舉例證實了 ISET 在分析六種三環抗抑郁藥方面的優勢。在 1290 Infinity II 液相色 譜系統中，與未啟用 ISET 相比，啟用 ISET 時可以獲得 99% 的保留時間一致性。
前言：安捷倫智能系統模擬技術 (ISET) 能夠模擬 不同液相色譜系統，從而實現分析方法在儀 器間的無縫轉移1,2。無需更改原始方法，僅 通過增加等度步驟等途徑就能得到相同的色 譜分析結果，從而使液相色譜分析方法的無 縫轉移成為可能。這使得用戶在運行原先的 方法時無需對儀器或方法做任何改動，也讓 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統成為真 正能夠運行其他 HPLC 和 UHPLC 方法的通用 系統。而用戶也能夠選擇從 1290 Infinity II 液相色譜系統廣闊的能力范圍與性能 中受益。 三環抗抑郁藥是*用于治療抑郁癥的鎮靜 劑之一。此類藥物得名于其化學結構中特征 性的三環。所有成分均有情緒增強的功效， 通常在服藥 2 - 4 周后明顯見效。三環抗抑 郁藥能夠抑制腦內的神經元對神經遞質血清 素、去甲腎上腺素和多巴胺的再攝取。抑郁 癥患者的特點就是腦中上述神經遞質的濃度 均過低。三環抗抑郁藥對神經遞質利用率的 提高有助于抵消神經遞質缺乏帶來的影響。 三環抗抑郁藥的分析在臨床化學與法醫毒理 學領域均非常重要。高效液相色譜 (HPLC) 是通常用于血清、血液或尿液樣品鑒定和定 量分析的穩定而可靠的工具。 本應用簡報介紹了六種三環抗抑郁藥混合物 的分離方法。分析結果證明，無需改動原方 法即可將 1100 系列二元液相色譜系統中的 方法輕松轉移至 1290 Infinity II 液相色譜系 統中；還證明了啟用 ISET 功能即可使保留 時間保持不變。
實驗部分 儀器 所有實驗均在 1100 系列二元液相色譜系統 和 1290 Infinity II 液相色譜系統中完成，兩 臺系統分別包括以下模塊。 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統： • Agilent 1100 二元泵 (G1312A) • Agilent 1100 自動進樣器 (G1313A) • Agilent 1100 柱溫箱 (G1316A) • Agilent 1100 二極管陣列檢測器 (G1315B) Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統： • Agilent 1290 Infinity II 高速泵 (G7120A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B) • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫 箱 (G7116B) • Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列檢 測器 (G7117B)
色譜柱 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 × 75 mm, 3.5 µm（部件號 966967-902） 軟件 Agilent OpenLab CDS ChemStation，LC 和 LC/MS 系統版，修訂版 C.01.07 [采用 ISET 4 的 22] 樣品 六種三環抗抑郁藥混合物（按洗脫順序排 列）：普羅替林、曲米帕明、去甲替林、丙咪嗪。 化學品 所有試劑均為液相色譜級。甲醇購自德國 Merck 公司。新制超純水產自配置 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水純化系統。碳酸氫銨和 三環抗抑郁藥購自 Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, U.S)。
結果與討論 三環抗抑郁藥的分析選用傳統方法，方法具 體內容已在 2002 年的安捷倫應用簡報中進 行了介紹3 。該方法采用 4.6 × 75 mm、裝填 3.5 µm 顆粒的傳統 HPLC 色譜柱。將該方法 分別用于 1100 系列二元液相色譜系統、未采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統以及 采用了 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統 中。通常將分析方法由傳統儀器向 UHPLC 系統進行轉移時會出現問題，這些出現的 問題是由混合行為差異以及現代 UHPLC 系 統的延遲體積和過渡體積顯著降低造成的 （圖 1）。與 1100 系列二元液相色譜系統相 比，六種三環抗抑郁藥在 1290 Infinity II 液 相色譜系統中的保留時間更短。其他所有現 代 UHPLC 儀器在運行傳統的液相色譜方法時 都會同樣出現類似現象。 一般用兩種途徑來解決這一問題： 1. 在梯度洗脫的起始階段增加等度洗脫步驟 2. 通過增加額外管線增大延遲體積 上述兩種方法均可補償較小的延遲體積，但 并不影響混合性能或過渡體積。在不進行任 何補償的情況下，全部六種分析物的保留時 間偏移范圍介于 6% - 9% 之間（表 2）。圖 2 顯示從 1100 系列二元液相色譜系統向啟用 ISET 與未啟用 ISET 的 1290 Infinity II 液相 色譜系統進行的方法轉移。 啟用 ISET 后，保留時間與原色譜圖具有良 好的一致性。與未啟用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統相比，啟用后全部所分析化 合物的保留時間偏差均小于 1%（表 2 右側 列）。智能系統模擬技術中規定的允許偏差 為 5% 以下4 。
從保留時間和峰面積的精密度方面來看，采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統明 顯優于 1100 系列液相色譜系統（表 3）。
結論 模擬其他 HPLC 或 UHPLC 儀器時，Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統具備的 ISET 功 能使得用戶無需改動儀器或方法即可運行現 有 HPLC 或 UHPLC 方法，并能夠獲得高度一 致的色譜圖（保留時間一致性高于 99%）。 在 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統與 啟用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相 色譜系統中分別采用傳統方法分析六種三環 抗抑郁藥所得到的結果證明了上述結論。此 外，保留時間和峰面積的精密度也得到了明 顯提升。