化工儀器網
技術文章
采用高效液相色譜法測定牛奶中甲砜霉素
閱讀：992 發布時間：2021-12-14前言 甲砜霉素是氯霉素的同類物，抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相仿，具廣譜抗微生 物作用，主要用于畜禽的細菌性疾病，尤其是大腸桿菌、沙門氏菌及巴氏桿菌感 染。隨著氯霉素的禁用，甲砜霉素開始廣泛用于動物飼料以及獸藥中，進而造成 動物性食品如牛奶和畜肉產品中有少量的甲砜霉素殘留，對人體健康也造成一定 的損害。目前，人們普遍認為甲砜霉素防治畜禽疫病的，鑒于動物飼料 生產商或者養殖戶任意加大甲砜霉素用量，為監控動物性食品中該藥的殘留，歐 共體和我國均規定其在食品動物各組織中的最高殘留*為 0.05 mg/kg。 本文所述方法參照 GB 29689-2013 國標方法，建立了一種牛奶中甲砜霉素殘留分 析的高效液相色譜法。該方法采用乙腈對牛奶樣品中甲砜霉素進行提取，同時 使用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱對樣品進行凈化，并利用安捷倫 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對目標物進行快速分析。該方法適用于牛奶 中甲砜霉素殘留量的檢測，*國標方法對于牛奶中甲砜霉素殘留量檢測 要求。
甲砜霉素分析 對試樣進行樣品前處理：稱取試料 5 ± 0.05 g（購買于當地超市），于 50 mL 離心 管中；加乙腈 10 mL，渦旋 1 min，超聲 10 min，5000 r/min 0 oC 低溫離心 5 min， 取上清液于 50 mL 離心管中；殘渣中加乙腈 10 mL，重復提取一次，合并兩次提 取液，于 45 oC 氮氣吹掃至近干；加去離子水 10 mL 于離心管中，超聲 5 min 使充 分溶解，加 20 mL 正己烷，振蕩 5 min，5000 r/min 0 oC 低溫離心 5 min，丟棄上層 正己烷層（包含兩項間的脂肪膜），用氮氣吹掃去除殘余的正己烷，取下層溶液 待凈化。所得樣品提取液經 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱凈 化和富集后，使用配備了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜 柱的高效液相色譜系統對其中的甲砜霉素殘留進行快速分 析，圖 1 所示為固相萃取操作流程，表 1 所示為液相色譜分 析條件。
如圖 2 所示，采用 Poroshell 120 EC-C18 快速色譜柱，單次運行 10 分鐘內即可完成樣品分析，比原國標方法節約近一半時間。 經乙腈萃取沉淀蛋白并經 Bond Elut C18 固相萃取凈化后的樣 品，其色譜圖中甲砜霉素出峰位置沒有基質干擾的存在，表 明此方法有效的去除了干擾雜質，如圖 3 所示。50 µg/kg 添 加水平的牛奶樣品連續進樣六次考察重復性（見圖 4），六次 進樣峰面積響應 RSD 為 0.91%，表明儀器系統具有很好的穩 定性。如圖 5 和表 2 所示，本文所述方法在 20 ~ 1000 ng/mL 線性范圍內甲砜霉素的線性相關性良好；在 10-100 µg/L 的 添加水平下，甲砜霉素的平均回收率為 75.0% ~ 95.0%，RSD ≤ 10% (n = 3)。
本文所述方法參照 GB 29689-2013 國標方法，但也對國標方 法進行了一定程度的優化，采用乙腈作為提取溶劑，是因 為乙腈不但可以保證對甲砜霉素的提取，對蛋白的沉淀效 果優于國標方法中所使用的提取溶劑乙酸乙酯，提取脂肪 的能力卻遠遠弱于乙酸乙酯。該方法不但大大提高了牛奶 中甲砜霉素的檢測效率和檢測通量，而且減少了分析過程 中的溶劑的消耗，同時大大減少了對環境的污染，在普通 液相色譜系統上即可實現牛奶中甲砜霉素殘留量的快速高 效檢測。