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滿足加州農藥和真菌毒素殘留監管要求的da麻LC/MS/MS分析方法
閱讀：750 發布時間：2021-7-8簡介：由于大麻對癌癥、多發性硬化癥和 肌萎側索硬化癥（ALS）等疾病 具有治療效果，美國超過半數的地 區已經將醫用大麻的使用合法化。1-3 與傳統的農作物一樣，農藥有時也用于大麻種植中， 以保護大麻免受蟲害，并提高產量。長期接觸農藥會引起嚴重的健康風險；因此，大麻中 的農藥分析對于消費者的安全來說是一個重要的話題。近來，新聞報道稱，受農藥殘留高 度污染的大麻產品比例驚人，導致大麻產品召回，并引發公共安全警報。現已發現，大麻 花上殘留有禁用的農藥，如，腈菌唑、吡蟲啉、阿維菌素、乙螨唑和螺蟲酯，這些農藥殘 留物在大麻提取物和大麻食用品中得到了進一步的濃縮。2015 年 10 月，由于農藥污染， 科羅拉多州召回了 20,000 包大麻花，2016 年 11 月，俄勒岡州針對特定批次的da麻發 布了健康警報。而且，現今的許多大麻產品都是通過燃燒吸入，因此，消費者和監管機構 越來越擔心吸入農藥化合物的未知影響。4-5 除農藥外，大麻的生長條件也有利于霉菌和真 菌的生長，這些霉菌和真菌會產生致癌的真菌毒素，包括赭曲霉素 A 和黃曲霉毒素。因此， 對大麻中農藥和真菌毒素的檢測對于確保消費者安全和質量控制來說至關重要。
高效液相色譜 - 串聯質譜法（LC-MS/MS）已成為農藥和真 菌毒素分析的方法，因為它具有*的選擇性、靈敏度、 重現性，而且在分析前無需繁雜的樣品前處理。盡管已有 氣相色譜 - 質譜法（GC-MS/MS）可用于大麻樣本中的農藥 分析，但此類方法只適用于一小部分分析物。諸如dign酰肼（極 性較大化合物）以及阿維菌素（高分子量化合物）之類的 化合物，不適合用 GC-MS/MS 法進行分析，因為這些化合 物在 GC 的進樣口位置或者高溫的色譜柱中遇熱不穩定且易 分解。對于復雜基質中的農藥分析，GC-MS/MS 方法不像 LC-MS/MS 方法那樣適用，因為 GC-MS/MS 方法需要繁雜 的樣品前處理，以防止復雜的基質污染 GC 的進樣口。6,7
由于對于大麻樣本的農殘分析沒有聯邦指南，美國各州已 經制定了各自的測試指南。俄勒岡州是美國第一個對大麻 中農藥殘留分析制定綜合指南，并為大麻中 59 種農藥設定 監管限值的州。8 然而，加州已經對大麻花和大麻食用品中 的 66 種農藥（包括俄勒岡州名單上除一種農藥以外的所有 其他農藥，以及另外 8 種農藥）和 5 種真菌毒素的殘留物 制定了更嚴格的殘留限值。9 目前已有大量關于大麻農藥分 析的報告發表，但這些研究有一定的缺陷。10-12 大多數此類 研究要么沒有達到加利福尼亞州的殘留限值；要么使用耗 時的樣品前處理方法（例如，dSPE 的 QuEChERS 方法）， 且對某些農藥的回收率較低，需要使用基于 LC-MS/MS 和 GC-MS/MS 的儀器來分析所有的農藥。這大大增加了分析 的成本、復雜性和分析時間。在本項研究中，珀金埃爾默 （PerkinElmer）應用開發團隊分析了添加在大麻花提取物 中的所有 66 種農藥（包括典型的用 GC-MS/MS 方法分析的 極度疏水性農藥和含氯農藥）和五種真菌毒素，其分析結 果遠遠低于加利福尼亞州規定的殘留限值。LC-MS/MS 儀器 使用電噴霧離子源（ESI）和大氣壓化學電離源（APCI）以 及采用簡單的溶劑提取方法，該方法對所有分析物的回收 率都達到了 70%-120% 的可接受范圍。
實驗 硬件 / 軟件 采用珀金埃爾默 LC-MS/MS QSight ? LX50 UHPLC 系統進行 色譜分離，同時利用具有雙離子源，即電噴霧離子源（ESI） 和大氣壓化學電離源（APCI）的珀金埃爾默 QSight 220 MS/ MS 檢測器進行檢測，該檢測器獨立運行，具有兩個獨立的 離子源入口。所有的儀器控制、數據采集和數據處理都使 用 Simplicity ? 3Q 軟件平臺完成。 樣品制備方法 下面是 10 倍稀釋后的樣品制備步驟： 取大約 5 g 大麻花，作為每個樣品批次的代表物，用研 磨機研磨。
量取 1 g 的樣品，放入 50 mL 離心管中。 添加 10 μL 的內標溶液。 將 3 個鋼球（直徑 10 mm）加到試管中，以便提高渦 旋混合時的提取效率。 加入 5 mL LC/MS 級的乙腈到試管中，并將其蓋緊。 將試管放置在多管旋渦混合器上，渦旋混勻 10 分鐘。 以每分鐘 3000 轉的轉速離心 10 分鐘。 用 0.22 um 的尼龍注射器將溶劑過濾到 5mL 的安珀瓶 中，并將其蓋緊。 將樣本 ID 貼在瓶子上。 取 0.5 mL 的提取樣品轉移到 2 mL 的液相小瓶中，再 用 0.5 mL 的 LC/MS 級乙腈稀釋，并混合。 注入 3 ?L 的樣本，使用農藥方法進行 LC-MS/MS 分析。
……
結論 本研究論證了一種*的、定量的、快速且可靠珀金埃爾默LC-MS/MS 方 法，用于分析大麻樣品中不同的大麻農藥和真菌毒素殘留物。 所提出的溶劑萃取法適用于符合加州條例規定的實驗室要求， 因為從大麻基質中提取的所有農藥和真菌毒素的回收率 RSD 都 在 70%-120% 的可接受范圍內，且相對標準偏差（RSD）小 于 20%。這種方法可用于定性和定量分析低濃度（0.005-0.25 ?g/g）的所有 66 種農藥和五種真菌毒素，遠低于加利福尼亞 州確定的分析限值，且精確度較高。這種方法能對所有 66 種 農藥（包括通常采用 GC-MS/MS 方法分析的極疏水性化合物和 含氯化合物）以及五種真菌毒素進行篩選和定量，成為使用單 一儀器對大麻中的農藥和真菌毒素進行篩選和定量的一種新穎 方法。