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使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class分析飼料中的抗球蟲劑
閱讀：668 發布時間：2021-2-25應用優勢：使用沃特世ACQUITY UPLC ® I-Class高效液相色譜系統和Xevo ® TQ-S開 發出一種檢測飼料樣品中的11種抗球蟲劑 的快速、穩健、準確和靈敏的方法。 ■ 與原有HPLC/MS-MS方法相比，飼料樣品提 取物可進一步稀釋50倍，進樣體積只有 原來一半。 ■ 運行時間從16 min（HPLC/MS-MS）縮短至 8 min（UPLC/MS-MS）。 ■ RADAR™能夠提供關于基質效應的相關信 息，因此是方法開發的一種重要工具。
簡介： 球蟲病是一種由原生動物球蟲引起的動物腸道寄生蟲病。這種疾病通 過接觸受感染的糞便或攝入受感染的組織在動物之間傳播。主要癥狀 為腹瀉，嚴重時變為便血。大多數動物感染球蟲后無癥狀；但是動物 幼體或免疫力低下的動物可能會出現包括死亡在內的嚴重癥狀。其中 家養動物、工業化飼養的家禽和兔子為易感群體。 目前，根據歐盟法規2003/1831/EC，11種抗球蟲劑經批準可作為飼料添 加劑。其它一些法規還規定了可用于特定動物物種的抗球蟲劑。由于 飼料公司常會用同一生產線生產不同的飼料，因此難以避免殘留的抗 球蟲藥發生批次間轉移。飼料公司本身努力避免交叉污染，并且歐盟 發布指令2005/183/EC規定了抗球蟲藥的大殘留濃度（2009/8/CE）以 保護動物健康并將對消費者的風險降至低。該指令規定飼料的大 殘留濃度：用于敏感動物物種的為1 %，相對不敏感的非標靶動物物種 為3 %。表1中示出的所需LOQ水平取決于藥物，根據提取方案做進一步 限定。這些LOQ濃度差異較大，難以在一次多殘留分析中，分析所有組 分并實現良好的靈敏度、準確度和線性范圍。 此外，飼料是非常復雜的混合物。通常情況下無法對每種飼料使用基 質匹配校準法或標準品加入法，而是采用內標法和只對某一種飼料基 質。基于同種飼料基質，在不同濃度下進行加標回收率實驗，以驗證 方法的準確度。
*，基質可顯著改變電噴霧電離的響應，可能使信號增強，但更可能的是抑制信號。 通過減少源區中基質離子的量可以使基質效應小化。一種途徑是通過稀釋樣品實現（如 果所用的方法足夠靈敏，則此途徑可行），使得加載到色譜柱上的基質減少，在常規食品和飼 料檢測實驗室工作時也無需頻繁清洗儀器，從而延長了儀器的正常工作時間，提高了方法的穩 健性。
本應用紀要介紹了一種快速、準確且穩健的UPLC/MS-MS方法，該方法利用Waters ® ACQUITY UPLC I-Class和Xevo TQ-S系統檢測飼料中殘留濃度低至0.25 %的11種抗球蟲劑。Xevo TQ-S是一種高靈敏的 串聯四極桿儀器，具有快速轉換正/負離子的功能，能夠應對頗具挑戰性的基質。
實驗 樣品制備 本方法參考先前應用于HPLC-MS-MS的方法，對其進行了適當的轉換以用于UPLC ®，除此之 外還包括終的稀釋步驟。 1. 稱取5 g研磨均勻的飼料樣品，放至50 mL一次性離心管中。 2. 加入50 µL內標混合溶液（50 µg/mL氯苯胍-d8、尼日利亞菌素，25 µg/mL DNC-d8，5 µg/mL 地克珠利-bis、癸氧喹酯d5）。 3. 加入10 mL 10 % Na2CO3溶液，手動振蕩。 4. 加入15 mL乙腈。 5. 振蕩30 min。 6. 在2000 rpm （4 ℃）下離心5 min。 7. 將上清液轉移至50 mL試管中。 8. 再次用乙腈提取，合并兩次所得的有機提取物。 9. 將1 mL提取物轉移至玻璃管中，并用初始流動相將樣品稀釋50倍。
UPLC條件 系統： ACQUITY UPLC I-Class 色譜柱： ACQUITY BEH C18 2.1×100 mm 柱溫： 50 ℃ 樣品溫度： 10 ℃ 進樣： 10 µL 流動相： A 0.1 %甲酸水溶液 B 0.1 %甲酸和甲醇混合液 梯度如表2所示。 MS條件 MS系統： Xevo TQ-S 極性： ES +/- 毛細管電壓（kV）： ES+為1.00， ES-為3.00 源溫度： 150 ℃ 脫溶劑氣溫度： 500 ℃ 錐孔氣體流速： 150 L/h 脫溶劑氣流速： 1200 L
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結論 利用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S系統，開發出一種快速、 穩健、準確和靈敏的分析方法，用于檢測飼料樣品中11 種抗球蟲藥。與原有HPLC/MS-MS方法相比，飼料樣品提取 物可稀釋50倍，進樣體積只需原來的一半。這使清洗儀器 的頻率降低，延長了儀器的正常運行時間，提高了檢測的 可靠性。RADAR功能能夠提供關于基質效應的信息，是方 法開發的一種重要工具。