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使用安捷倫液質聯用分析牛肉中的多類別獸藥多殘留
閱讀：702 發布時間：2021-1-14摘要： Agilent Captiva 增強型脂質去除 (EMR-Lipid) 過濾柱是第二代 Agilent EMR-Lipid 產品，采用固相萃取 (SPE) 形式，用于在不影響分析物回收率的情況下實現高選擇性脂質去除。SPE 過濾柱提供了簡便的直通式凈化工作流程，只需極少的方法開發。萃取管經過優化，可在大體積樣品凈化過程中重力自洗脫，免除了控制真空或壓力的麻煩。為促進脂類捕獲并提高疏水性化合物的回收率，需要在 Captiva EMR-Lipid 吸附劑中加入 20% 水以活化 EMR 凈化吸附劑。本研究展示了 Captiva EMR-Lipid 在分析牛肉中 39 種代表性多類別獸藥中的應用。采用兩步樣品萃取，使親水性和疏水性化合物均獲得滿意的回收率。然后將萃取液混合并加載到 Captiva EMR-Lipid 過濾柱上進行凈化。評估了該方法的基質效應、分析物回收率和方法重現性。與其他過濾柱直通式凈化產品相比，Captiva EMR-Lipid 過濾柱提供了更高效的基質凈化和更出色的疏水性分析物回收率。
前言：獸藥廣泛用于動物食品中以預防動物疾病或作為生長促進劑。這些藥物可能在動物組織中發生富集，使用不當會導致藥物殘留于食用組織中，對人類健康構成威脅。隨著公眾對食品安全的日益關注，大多數國家/地區都會對動物食品生產中使用的獸藥進行監管1,2。動物食品（如肌肉、肝臟和蛋類）屬于復雜基質；因此有必要在儀器分析之前使用高效前處理方法進行樣品萃取、凈化和濃縮。已有的樣品前處理方法包括傳統的溶劑萃取、固相萃取 (SPE) 或幾項技術的組合。這些方法通常費力費時，僅適用于有限的化合物類別，并且需要進行方法開發。多類別多殘留方法在監管性監測項目中越來越受青睞，因為它們可以擴大分析范圍并提高實驗室效率。過去幾年，文獻中已經報道了對 100 多種獸藥的分析3-5。樣品前處理通常涉及采用乙腈 (ACN)/水混合物進行預萃取，然后采用 C18 凈化或其他凈化技術的組合。然而，現有凈化技術存在脂質去除效率低下和分析物意外損失等局限性。ACN/水混合物直接萃取可能影響萃取步驟中的蛋白質去除效率和疏水性分析物的可萃取性。安捷倫增強型脂質去除 (EMR-Lipid) dSPE 凈化產品自 2015 年推出以來備受關注。EMR-Lipid 吸附劑通過體積排阻和疏水相互作用的組合機制，與脂類化合物的非支化烴鏈發生特異性相互作用。這種組合機制提供了高選擇性脂質去除，且對目標分析物沒有不良影響。該技術已被用于復雜基質中的多類別多殘留農藥分析，可提供基質凈化和結果6,7。第二代產品 Agilent Captiva EMR-Lipid 過濾柱減少了吸附劑活化所需的水分比例，且隨后無需 Polish 凈化鹽析萃取步驟。這樣簡化了工作流程并改善了疏水性化合物在凈化過程中的溶解度。
本研究考察了 Captiva EMR-Lipid 過濾柱凈化在分析牛肉中 39 種棘手的代表性獸藥的樣品前處理過程中的應用。所選擇的代表性獸藥涉及 17 種不同類別，包括親水性和疏水性藥物，酸性、中性和堿性藥物，以及一些難分析的類別，如四環素和 β-內酰胺。表 1 列出了藥物類別、法規信息、保留時間以及用于分析這些獸藥的 MS/MS 條件。
實驗部分：試劑與化學品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或分析純級。乙腈 (ACN) 購自 Honeywell (Muskegon, MI, USA)。二甲基亞砜 (DMSO) 和脫水乙二胺四乙酸二鈉鹽 (NaEDTA) 購自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。試劑級甲酸 (FA) 購自安捷倫公司（部件號 G2453- 86060）。獸藥標準品和內標購自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。溶液與標樣用 DMSO 配制 2.0 mg/mL 的標樣和內標 (IS) 儲備液，以下儲備液除外： • 用 DMSO 配制 1.0 mg/mL 的達氟沙星儲備液 • 用 DMSO 配制 0.25 mg/mL 的環丙沙星儲備液用水配制所有 β-內酰胺藥物和頭孢唑啉儲備液，濃度為 2.0 mg/mL。除 β-內酰胺藥物、頭孢唑啉和四環素藥物儲備液在聚丙烯塑料管中配制以外，所有其他儲備液均在棕色玻璃樣品瓶中配制。所有溶液均保存于 -20 °C 下。根據其儀器響應不同，將 39 種化合物分為兩組：第 1 組 (G1) 和第 2 組 (G2)。在 1:1 ACN/水中配制兩種混合標準工作溶液，濃度分別為 25/5 µg/mL 和 5/1 µg/mL (G1/G2)。在 1:1 ACN/水中配制 25 µg/mL 氟尼辛-d3 IS 工作溶液。將 2 mL 甲酸和 2 mL DMSO 加入 100 mL 經預冷卻的 ACN，每天新鮮配制冷萃取溶劑。將 1.8612 g NaEDTA 粉末溶于 50 mL Milli-Q 水中，制得 0.1 M NaEDTA 溶液。溶液在室溫下保存。混合 80 mL ACN 與 20 mL Milli-Q 水，制得 80:20 ACN/水。
結果與討論：簡便易用的過濾柱凈化使用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱進行復雜樣品基質凈化的一個重要特征是簡便易用。EMR-Lipid 吸附劑針對的是不需要的脂質干擾物而非分析物，并采用直通方法。將樣品混合物加載到過濾柱上，使其穿過過濾柱中填充的 Captiva EMR-Lipid 吸附劑。脂類被捕集在吸附劑中，而目標分析物穿過過濾柱，無需活化、清洗和洗脫等傳統的 SPE 步驟。因此，使用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱大大簡化了凈化過程，節省了大量時間和吸附劑。直通式凈化無需針對清洗和洗脫步驟進行傳統的 SPE 方法開發。對 Captiva EMR-Lipid 的一種可能的方法改型是使用二次洗脫步驟以實現*洗脫。在二次洗脫時，建議使用 20:80 水/ACN 混合物，其體積為載樣體積的 20%–25% 左右（例如，在載樣體積為 5 mL 時，采用 1–1.25 mL 進行二次洗脫）。后，重力洗脫的產品設計使樣品在加載到 EMR-Lipid 過濾柱上之后即可自動操作。無需通過調節真空度或正壓來控制洗脫流速。這些特征使得在采用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱凈化來制備復雜的食品樣品時，可獲得更高的實驗室工作效率。