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目的 ：對(duì)蛋白沉淀血漿中的強(qiáng)極性化合物直 接進(jìn)樣分離，以進(jìn)行生物分析。

背景 ：大多數(shù)生物分析方法都采用蛋白質(zhì)沉淀 (PPT)提取法，這是因?yàn)樵摷夹g(shù)簡(jiǎn)單、快速 且成本較低。典型的PPT使用3:1的有機(jī)溶 劑與生物樣品，可得到大約75%的有機(jī)提 取物。傳統(tǒng)上，通常會(huì)采用反相液相色譜 (RPLC)分析樣品。 對(duì)于強(qiáng)極性化合物而言，由于強(qiáng)溶劑作用 產(chǎn)生的色譜峰形較差，明顯的是出現(xiàn) 峰前伸和/或譜峰分叉，因此不能直接將高 濃度有機(jī)提取物注入RPLC系統(tǒng)。因此，在 向色譜系統(tǒng)進(jìn)樣之前需要進(jìn)行額外的樣品 處理，包括蒸發(fā)和復(fù)溶或用水稀釋。 

通過(guò)從RPLC到UPC2 改變MS入口技術(shù)，無(wú)需蒸發(fā)和 復(fù)溶等額外樣品制備步驟，便可以直接進(jìn)樣分 離高度有機(jī)樣品中的極性化合物。

 

 解決方案 ：UltraPerformance Convergence Chromatography™ (UPC2®)使用超臨界二氧化碳作為主要流動(dòng)相， 其保留機(jī)制與RPLC不同，可直接進(jìn)樣高度有機(jī) 提取物。 在本示例中，通過(guò)PPT提取法使用乙腈以3:1的 比率從大鼠血漿中提取了四種極性較強(qiáng)的化 合物，直接進(jìn)樣至ACQUITY UPC2 ™系統(tǒng)中，并使 用傳統(tǒng)RPLC系統(tǒng)作為對(duì)比。UPC2 分析在ACQUITY UPC2 BEH色譜柱上進(jìn)行，采用經(jīng)氫氧化銨改性 的甲醇作為共溶劑(流動(dòng)相B)。RPLC分析在配 備ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱的ACQUITY UPLC®系 統(tǒng)上進(jìn)行，采用水和經(jīng)氫氧化銨改性的乙腈 作為流動(dòng)相。 圖1將含咖fei因的PPT提取物在ACQUITY UPLC系統(tǒng) 中的1 µL直接進(jìn)樣和3 µL直接進(jìn)樣與在ACQUITY UPC2 系統(tǒng)中的7 µL進(jìn)樣進(jìn)行了對(duì)比。RPLC中的 1 µL進(jìn)樣顯示出良好的峰形，但在3 µL進(jìn)樣體積 下峰形發(fā)生變形，可以觀察到前伸峰和譜峰分 叉。而采用UPC2 進(jìn)行的7 µL進(jìn)樣依然表現(xiàn)出良好 的峰形。 以相同方式測(cè)試的其它極性分子也觀察到類(lèi)似 的結(jié)果(表1)。表1還顯示了使用RPLC和UPC2 時(shí)， 在PPT提取物中測(cè)試的所有分析物的大進(jìn)樣體 積。

 

這些數(shù)據(jù)明確證實(shí)了使用沃特世ACQUITY UPC2液相色譜系統(tǒng)分析高度有機(jī)提取物中極 性化合物的優(yōu)勢(shì)，并且不必像RPLC系統(tǒng)那樣在進(jìn)樣前需要進(jìn)行額外 的樣品制備，從而簡(jiǎn)化了工作流程。

總結(jié)：通過(guò)從標(biāo)準(zhǔn)RPLC到UPC2 改變MS入口技術(shù)，無(wú)需蒸發(fā)和復(fù)溶等額外樣品 制備步驟，便可以直接在ACQUITY UPC2 系統(tǒng)中注入溶于高度有機(jī)樣品 中的極性化合物。為生物分析實(shí)驗(yàn)室增添UPC2 可以簡(jiǎn)化高度有機(jī)樣品 制劑中極性化合物的分析。