化工儀器網
技術文章
Agilent 1260 液相色譜系統對18 種抗生素進行有關物質分析
閱讀：1785 發布時間：2020-9-13摘要：本文介紹了使用 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱及 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統對 18 種抗生素進行有關物質分析的結果。本實驗使用《中國藥典》建議的流動相，能夠獲得出色的分離度及穩定的分析結果。本文提供的相關圖譜可作為抗生素 SEC 分析的參考。
前言：抗生素是臨床常用的藥物之一，較易發生過敏反應?？股刂械母叻肿泳酆衔镫s質是引發過敏反應的真正過敏原，因此嚴格控制抗生素藥物中的高分子聚合物含量具有重要意義。聚合物含量通常照分子排阻色譜法測定。目前大多采用葡聚糖凝膠柱，但此類填料的機械強度差且柱效低，因此聚合物分析填料逐漸發展為球狀親水硅膠。
《中國藥典》已有數個品種以有關物質 II 的檢測項目形式收載了使用球狀親水硅膠 SEC 的方法1 。目前市面上主要有兩種類型的球狀親水硅膠基質：鍵合二醇基的硅膠 (USP L20) 和鍵合親水涂層的硅膠 (USP L59)。較為傳統的 USP L20 鍵合相由于存在較多的殘留硅醇基，通常需要較高離子強度的流動相以克服非特異性相互作用。而 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱（L59 型）采用聚合物親水涂層，殘留硅醇基數目大幅減少，從而能夠有效抑制非特異性相互作用，實現聚集體的準確定量分析。此外，2.7 μm的填料粒徑以及更大的孔容設計，都有助于進一步提升色譜分離效果。
實驗部分：試劑和樣品無水磷酸二氫鈉與十二水合磷酸氫二鈉均購自 Sigma-Aldrich 公司。實驗用水取自 Merck Millipore Milli-Q 超純水系統。磷酸鹽緩沖液：5 mmol/L Na2HPO4:5 mmol/L NaH2PO4 (61:39)。所有樣品均為實際樣品。樣品均為市購產品。樣品溶解于流動相后過 0.22 µm 濾膜。樣品濃度均為 1 mg/mL。儀器和設備本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統，該系統配備二極管陣列檢測器。所用色譜柱為 Agilent AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm（部件號：PL1180-5350）。樣品前處理準確稱取 10 mg 抗生素粉末狀樣品于 10 mL 離心管內，加入流動相 10 mL 后，超聲 1 分鐘。經 0.22 µm 濾膜過濾后，取續濾液進樣分析。色譜條件色譜柱：AdvanceBio SEC 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 µm（部件號： PL1180-5350）流動相：5 mmol/L 磷酸鹽緩沖液（含 5% 乙腈），pH 7.0 進樣量：5 μL 柱溫：25 ℃ 流速：0.6 mL/min 等度運行檢測波長：254 nm
結果與討論：本實驗采用了 Agilent AdvanceBio SEC 色譜柱和 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統對阿莫西林、頭孢氨芐、頭孢丙烯、頭孢地尼、頭孢地嗪、頭孢克洛、頭孢拉定、頭孢美唑、頭孢米諾鈉、頭孢哌酮鈉、頭孢匹羅、頭孢羥氨芐、頭孢曲松鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢他啶、頭孢替唑鈉、頭孢西林鈉、頭孢唑肟鈉共 18 種抗生素進行有關物質分析，并獲得了分離結果，
與 TSK G2000SWxl 相比，AdvanceBio SEC 色譜柱擁有更好的分離度與分離效率，色譜柱塔板數是 TSK 同規格產品的近 2 倍。AdvanceBio SEC 色譜柱能耐受更高的壓力，機械強度更高，AdvanceBio SEC 色譜柱在前述條件下壓力約為 100 bar， AdvanceBio SEC 色譜柱耐壓 400 bar，推薦操作壓力不超過 200 bar，色譜柱壽命明顯延長。每份樣品均重復進樣 3 次，保留時間無明顯漂移，結果重復性良好。
結論:本文使用 AdvanceBio SEC 130 , 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色譜柱，采用《中國藥典》現有球狀親水硅膠 SEC 柱的分析方法，對 18 種抗生素進行了有關物質分析，分離度與 TSK G2000SWxl 相比提升 20%；傳統 G-10 柱聚合物峰與主峰不能達到基線分離，使用 AdvanceBio SEC 130 , 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 色譜柱，主峰相鄰峰與主峰基本能實現基線分離，獲得了出色的分離度及穩定的結果 。該方法可以作為各個生產企業及檢測機構抗生素質量控制中有關物質 II 檢項的參考。