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同時鑒定和定量水果和蔬菜中300種農藥及其代謝物
閱讀：725 發布時間：2020-6-15目前，世界上使用的農藥已超過800種，其中很多化合物在飲用水和食品中法定允許量即大殘留 限要求得到控制。對于這種目標物分析，迫切需要能夠進行同時多殘留組分的分析方法，這樣可以大大 降低工作量。但是，很多農藥用GC-MS分析很困難或幾乎不能分析，但是卻可以用LC-MS/MS多殘留組分 分析方法進行鑒定和定量。MRM（多反應監測）是優先選擇的掃描模式，然而，對每個農藥而言，單一 MRM離子對并不能夠確證該農藥的存在，需要采用第二個MRM離子對來驗證分析結果。絕大多 數樣品，如水果、蔬菜等，含有需要監測的農藥種類不超過10%，因此，一部分確證離子對并不需要，因 為有部分農藥并不存在，先前的采集時間浪費掉了。所以，我們研究了一種采用單一MRM離子對鑒定和 定量農藥的方法。
本研究利用新型串聯四極桿質譜儀- 四極桿 -線性離子阱融合質譜儀3200 QTRAP®的MRM掃描觸 發“增強子離子掃描EPI”的“信息關聯掃描information-dependent acquisition (IDA)”技術確證所檢測的化 合物。其結果是MS/MS系統的采集時間主要用于大多數目標化合物的快速篩選上，只有當檢測到某個 農藥存在時才自動進行確證測定。確證測定提供了碰撞碎片離子的全譜，與農藥譜庫中的圖譜進行檢
索、比較。
樣品制備 樣品制備如圖1所示
色譜分離條件 Agilent 1100液相色譜系統：二元泵系統、自動進樣器、柱溫箱。 色譜柱：Phenomenex Aqua，5 µm，18 Å，C18，50 mm×2 mm。 流動相：A相—水 + 5 mmol/L甲酸銨；B相—甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨。 步驟 時間 (min) 流速(µL/min) A (%) B (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃；進樣體積：20 µL。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統：二元泵系統、自動進樣器、柱溫箱。 色譜柱：Phenomenex Aqua，5 µm，18 Å，C18，50 mm×2 mm。 流動相：A相—水 + 5 mmol/L甲酸銨；B相—甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨。 步驟 時間 (min) 流速(µL/min) A (%) B (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃；進樣體積：20 µL。
MS/MS檢測 3200 QTRAP® LC-MS/MS系統，TurboIonSpray®離子源（450 ℃），正離子方式模式。采用IDA關聯掃 描包含297組MRM離子對（駐留時間為5 ms，停留時間為1 ms，碰撞能量CE分別為+20、+35、+50 eV） 的篩選檢測掃描和在20、35、50 eV碰撞能下3個EPI掃描，掃描速度4000 amu/s，填充時間（fill time）為 100 ms。采用動態背景減法（DynamicBackgroundSubtraction，SBS）對篩選檢測掃描中的峰進行鑒定，然 后在包含有碰撞能量CE分別為+20、+35、+50 eV獲得的質譜圖庫中檢索、鑒定。
結果 作為特色，串聯四極桿的MRM掃描由于其具有高靈敏度和高選擇性是定量測定的shou選。要成功地進 行多目標農藥化合物的檢測，必須要有一個快速碰撞室。技術LINAC® 線性加速碰撞室用在AB公 司所有的串聯四極桿質譜儀和四極桿-線性離子阱融合質譜儀上，它采用一個軸向電場加速碰撞后的碎片 離子，大大縮短了離子的駐留時間，而信號強度基本不受影響。以前的研究發現，用API 2000™ LC-MS/MS 檢測100種農藥時25 ms的離子駐留時間綽綽有余，如今，3200 QTRAP® LC-MS/MS的靈敏度大大提高，因 此可以極大地縮短每個MRM離子對的離子駐留時間，從而增加檢測化合物的數量。圖2顯示了用5 ms駐留 時間檢測300種農藥(100 ng/mL)的MRM色譜圖。圖3顯示了1 ng/mL 12種農藥的MRM靈敏度數據，可用于水
加水至 5 g或10 g干燥或含水樣品中總體積至10 mL
加入20 mL甲醇均化，如需要可過濾或離心
加入氯化鈉溶液浸泡，Chem Elut
二氯甲烷提取，蒸發至干
甲醇/水溶劑再溶解 (樣品濃度約 1 g/mL)
0.45 µm膜過濾
50 mm x 2 mm RP18-柱，水 / 甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨
LC-MS/MS ESI+，297 MRM +3 EPI 模式分析
同時鑒定和定量水果和蔬菜中300種農藥及其代謝物
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果和蔬菜提取物中農藥的定量分析。圖4顯示了不同水果和蔬菜提取物的例子，在蘋果樣品中發現了蟲酰 肼（tebufenozide）并定量為11 µg/kg。為了確證蟲酰肼的定量數據，其EPI譜被自動采集并與譜庫中的圖 譜比對。純度符合度（Purity Fit）是確定譜庫中的圖譜與未知物的圖譜符合的程度，如圖5所示。用動態 背景減法（SBS）在檢測MRM離子對后觸發EPI掃描，這樣對于確證特別是對于共洗脫化合物能夠獲得高 質量的MS/MS圖譜。