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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）

膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）
  • 膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2025-05-30 13:34:48瀏覽次數：150評價

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產品概述 product description 貝博TM BBproExtra® 膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。膜蛋白提取試劑盒可以從細胞組織樣本中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。提取的蛋白樣品中不含鹽，可以直接用于等電聚焦、雙向電泳等。如下游實驗不需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，可選用 貝博用于Western Blotting、普通蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗的其他試劑盒（相關產品BB-3103）。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
雙向電泳
適用樣本
動物細胞/組織
產品特點
1、 使用方便。
2、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
雙向電泳
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?
使用方法
1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個以上細胞，在4℃，500g條件下離心3-5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
或者取50mg-100mg組織樣本，用冷PBS洗干凈，然后用刀盡可能剪碎，加400ul冷的試劑 A，用組織勻漿機/器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 洗滌后的細胞樣品中加入400ul冷的試劑 A，充分混勻。
4. 在2-8℃條件下振蕩20-30分鐘，至細胞充分裂解，細胞沉淀明顯減少。
5. 在2-8℃低溫下12000g離心5分鐘，取上清。
6. 在37℃水浴10分鐘。
7. 在37℃， 1000g離心3分鐘。
8. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50ul液體。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解該下層液體，即得膜蛋白樣品。
10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細胞上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

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