超高效液相色譜儀作為現(xiàn)代實驗室的核心分析設(shè)備，其規(guī)范操作直接影響檢測數(shù)據(jù)的可靠性。本文將從儀器準備、參數(shù)設(shè)置到日常維護全流程解析操作規(guī)范，為實驗人員提供標準化操作指南。
一、開機前準備與系統(tǒng)檢查
1.環(huán)境要求確認：實驗室溫度需穩(wěn)定在20-25℃，濕度控制在40%-60%，避免陽光直射與震動干擾
2.氣源壓力檢查：設(shè)定流動相脫氣機壓力為0.3-0.4MPa，確認氦氣純度
3.溶劑系統(tǒng)準備：使用HPLC級溶劑，按照標準比例配置流動相（如A：水含0.1%甲酸，B：乙腈含0.1%甲酸），使用0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15分鐘
二、系統(tǒng)初始化與平衡
1.管路沖洗程序：依次用甲醇/水(60:40)沖洗泵、進樣閥、色譜柱60分鐘
2.壓力測試確認：設(shè)置流速0.5 mL/min，觀察基線穩(wěn)定性，確保壓力波動＜±2%（如Waters ACQUITY H-Class）
3.波長校準：以氘燈/鎢燈為光源，校準檢測器在254nm處的吸收值（誤差＜±1nm）
三、進樣操作規(guī)范
1.樣品預(yù)處理：固體樣品需制成0.2-1.0 mg/mL濃度，經(jīng)過0.22μm濾膜過濾；生物樣品需酶解處理
2.進樣器維護：每批次分析后用流動相清洗進樣針5次，每周用65%硝酸浸泡30分鐘
3.進樣量控制：梯度洗脫時進樣體積＜10μL（如Agilent 1290 Infinity II），等度洗脫可適當(dāng)增加至20μL
四、檢測參數(shù)優(yōu)化
1.梯度洗脫程序：水相與有機相比例需線性變化，如0-5min(20:80)至20min(80:20)，切換時間差＜0.1min
2.流速控制：根據(jù)色譜柱規(guī)格調(diào)整（4.6×250mm柱適用1.0 mL/min，2.1×100mm柱適用0.3 mL/min）
3.檢測波長選擇：優(yōu)先采用化合物最大吸收波長，必要時采用多波長檢測（如UV 254nm/280nm雙波長）
五、數(shù)據(jù)處理與結(jié)果驗證
1.積分參數(shù)設(shè)置：峰寬閾值≥5s，斜率靈敏度10-20μV/s，拖尾因子≤1.5
2.定量方法驗證：R2值＞0.999，回收率95-105%，RSD＜2%（n=5）
3.原始數(shù)據(jù)存儲：按照GLP要求保存原始色譜圖，保留時間差＜0.2min（重復(fù)性實驗）
六、系統(tǒng)維護與安全規(guī)范
1.日常維護要點：
①每日檢查密封圈狀態(tài)，每周更換自動進樣器轉(zhuǎn)子密封
②每月超聲清洗脫氣機管路，每季度校驗流速準確性
2.關(guān)機程序：
①用純甲醇-水(50:50)以1mL/min沖洗系統(tǒng)30分鐘
②保持柱溫箱溫度在10-15℃待機
3.安全注意事項：
①禁止超壓操作（壓力保護閾值設(shè)為30-35MPa）
②廢液集中收集處理，避免有機溶劑泄漏
結(jié)語
通過嚴格執(zhí)行上述操作規(guī)范，可使超高效液相色譜儀保持最佳運行狀態(tài)。規(guī)范操作不僅保障數(shù)據(jù)準確性，更能延長系統(tǒng)使用壽命（正常達10年以上），為精準分析提供可靠技術(shù)支撐。
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