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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導(dǎo)法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠破骨經(jīng)TRAP染色檢測，純度可達30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠破骨原代細胞 | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | 見說明 | 貨號 | YS-01X7307 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠破骨細胞分離自骨組織和骨髓；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng)，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數(shù)學(xué)者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結(jié)構(gòu)、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞，屬于不增殖細胞群，不能增殖和傳代，只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 多核巨細胞
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
MCA38小鼠結(jié)腸癌細胞 MCA38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS | 合胞素1抗體 |
Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子抗體 | 細胞色素b5還原酶3抗體 |
卵泡刺激素結(jié)合蛋白1抗體 | 蛋白酶調(diào)解因子7抗體 |
細胞NB3特定蛋白抗體 | 前列腺素E合成酶抗體 |
信號傳導(dǎo)T淋巴細胞活化相關(guān)蛋白抗體 | 即刻早期應(yīng)答基因5樣蛋白抗體 |
NRG4 Protein Human 重組人 NRG4 蛋白 | 615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755 |
LTEP-s細胞，人肺鱗癌細胞 小鼠皮膚細胞,JB6-C30細胞 CL-0114Hs 578T(人癌細胞)5×106cells/瓶×2 | Tca-8113(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠虹膜色素上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
大鼠頜下腺上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | CL-0253A-427(人肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
L1210小鼠白血病細胞 L1210 mouse leukemia cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 小鼠破骨原代細胞蛋白酶調(diào)解因子7抗體 |
黑化大家鼠肺成纖維細胞;NRm | CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2 |
Promocell C-28011 Mesenchymal Stem CellAdipogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細胞成脂分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml | 山羊腎上皮樣細胞;DG-K1 |
人皮膚成纖維樣細胞;HSF2 | 桿菌菌體蛋白抗體 |
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 | 人髓核細胞總RNAHNPC NA |
原癌基因c FGR抗體 | 胞膜間內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體 |
賴氨酰氧化酶樣蛋白4抗體 | NRG4 Protein Human 重組人 NRG4 蛋白 |
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