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詳細介紹
小鼠口腔黏膜成纖維原代細胞
小鼠口腔黏膜成纖維細胞分離自口腔黏膜組織；口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通，后經咽峽與咽相續(xù)。口腔內有牙、舌等器官。口腔的前壁為唇、側壁為頰、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結構。口腔借上、下牙弓分為前外側部的口腔前庭(oral vestibule)和后內側部的固有口腔(oral cavity proper)；當上、下頜牙咬合時，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | Mouse Oral Mucosal Fibroblast Cells | 組織來源 | 口腔黏膜 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產品貨號 | YS-01X8508 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產品名稱：小鼠口腔黏膜成纖維細胞
組織來源：口腔黏膜
產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠口腔黏膜成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的小鼠口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的小鼠口腔黏膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
MR1 [derivative of HB-11048]中國倉鼠X小鼠B淋巴細胞雜交瘤 MR1 [derivative of HB-11048] Chinese hamster X mouse B lymphocyte hybridoma RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 還原型Ⅱ/酸腺嘌呤二核苷酸抗體 |
S100鈣結合蛋白A8抗體 | 細胞角蛋白4抗體 |
硫酸乙酰肝素6腦苷脂轉硫酸酶1抗體 | 蛋白酸酯酶-1B抗體 |
肽Y1受體抗體 | 葡萄糖轉運蛋白12抗體 |
鋅指蛋白ZBTB34抗體 | 激活素受體2B抗體 |
IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標簽) | KP-N-NS 人腎上腺母細胞瘤(腦轉移) |
SiHa人子宮頸鱗癌細胞 SiHa human uterine cervical squamous cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS | SHH Protein Mouse 重組小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 標簽) |
腎系膜細胞培養(yǎng)基MCM | EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0907 |
大鼠腎上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | 犬腎細胞;MDCK(NBL-2) |
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7 淋巴瘤細胞，Jecket細胞 A172(膠質母細胞瘤細胞) | 小鼠口腔黏膜成纖維原代細胞蛋白酸酯酶-1B抗體 |
DU 145, 人前列腺癌細胞 | CD33 Others Mouse 小鼠 CD33 / Siglec-3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
BEL-7404細胞，肝癌細胞 人子宮膜腺癌細胞,HEC-1-B細胞 小鼠肺腺癌低轉移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);LA1-VAP33-GFP | 小鼠膀胱上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-3E6 | 羧肽酶X(M14家族1)抗體 |
富含半蛋白結合蛋白抗體 | SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-7 |
有絲分裂驅動蛋白樣1抗體 | 半乳糖凝集素9抗體 |
跨膜結構域4亞家族成員2抗體 | IGFBP6 Protein Human 重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 (His 標簽) |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
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